AKIM SİTOMETRİ’DE RNA ÖLÇÜMÜNÜN ÖZGÜNLÜĞÜ VE GÜVENİRLİLİĞİ

Authors : Zuhal HAMURCU, Halil DEMİRTAŞ, Türkan PATIROĞLU

Pages : 130-136

View : 25 | Download : 13

Publication Date : 2006-06-01

Article Type : Research Paper

Abstract :Bu çalışmanın amacı akım sitomeride insert ignore into journalissuearticles values(AS); ile ölçümünün özgün ve güvenilir olup olmadığını test etmektir. Bu amaçla; RNA içeriği bilinen farklı hücreler ve RNA sentezini durduran ajanlar kullanılarak AS deki RNA ölçümünün özgünlüğü ve güvenirliliği dört ayrı işlemle test edildi.1); Periferal Kan Medyum içerisinde, mitojenle uyarılmış mononükleer hücrelerin insert ignore into journalissuearticles values(PKMNH=periferal kan mononukleer hücre); RNA içerikleri AS ile ve kit ile izole edilip spektrofotometride ölçülerek karşılaştırıldı. Her iki yöntemle bulunan sonuçların birbiriyle uyumlu oldukları görüldü insert ignore into journalissuearticles values(p=0.026, r=0.974); 2); AS’de RNA ölçümünün yinelenebilirliği aynı ve farklı kişilerden alınan örnekler çalışılarak test edildi. a); Sağlıklı bir kişiden 8 ml kan alınarak 4 farklı tüpe bölündü. Bölünen kanların mononükleer hücreleri izole edildi, boyandı ve RNA içerikleri AS’de ölçüldü. Aynı kişiye ait kan örneklerinin RNA içerikleri arasındaki varyasyon katsayısı insert ignore into journalissuearticles values(V);=%0,75 olarak bulundu. b); Beş sağlıklı kişiden 2 şer ml kan alındı ve mononükleer hücreleri izole edildi, boyandı ve RNA içerikleri AS’de ölçüldü. Beş sağlıklı kişinin RNA içerikleri arasındaki varyasyon katsayısı insert ignore into journalissuearticles values(V);= %1.72 olarak bulundu. 3); Aktinomisin deneyi: Aynı kişinin mononükleer hücreleri Periferal Kan Medyum içeren iki kültür flaskına ekilerek iki gün mitojenle uyarıldı. Kültür flasklarından birine RNA sentezini durudurmak amacıyla 24. saatte 0.05 µg/ml aktinomisin D ilave edildi, diğerine ise herhangi bir işlem yapılmadı. Mitojenle uyarılan mononükleer hücrelerin 48 saat sonra RNA içerikleri AS ile ölçüldü. Sonuçta aktinomisin-D ile etkileştirilmiş olan hücrelerin RNA içeriğinin artmadığı AS ile belirlendi. 4); RNA içerikleri bilinen hücrelerin F640 meanX değerlerinin AS ölçümlerinin karşılaştırılması: ALL insert ignore into journalissuearticles values(Akut Lenfoblastik Lösemi);, AML insert ignore into journalissuearticles values(Akut Miyeloid Lösemi);’li hastalardan ve sağlıklı bir kişiden 2’şer ml kan örneği alınarak, mononükleer hücreleri izole edildi, boyandı ve RNA içerikleri AS’de ölçüldü. ALL ve AML’li hastaların hücrelerinin RNA içerikleri sağlıklı bireyin hücrelerinin RNA içeriğinden daha yüksek bulundu. Sonuç olarak Türkiye’de hiç çalışılmamış, optimize edilmemiş olan AS’de RNA ölçüm yöntemi, yapılan bu çalışma ile hem tanı amaçlı, hem de araştırma amaçlı kullanılabilir, özgün ve güvenilir bir yöntem olarak geliştirilmiştir
Keywords : Akım sitometri, RNA ölçümü, RNaz A