EMBRİYO KÜLTÜRÜ TEKNİĞİ
Authors : Mehtap NİSARİ, Harun ÜLGER
Pages : 216-225
View : 13 | Download : 11
Publication Date : 2010-12-01
Article Type : Research Paper
Abstract :Akşam saat 5’de Wistar türü dişi ve erkek sıçanlar aynı kafeste tutulur. Ertesi gün dişi sıçanlardan vaginal smear alınarak sperm olup olmadığına bakılır. Vajinal smearde sperm görülen dişiler 0.5 günlük hamile olarak kabul edilir ve ayrı kafese alınarak 9 gün bekletilir. 9.5 günlük hamile dişi sıçanlara eter anestezisi uygulanarak düz bir satıh üzerine sırt üstü yatırılır ve hayvanın karnında V şeklinde kesi yapılarak deri yukarı doğru katlanır. Aortun çatallanma yerinden bir enjektörle girilerek alınabildiği kadar kan alınır. Kan alınır alınmaz 3500 rpm’de 5 dakika santrifüj edilir ve serum elde edilmek üzere saklanır. Uterus boynuzunda bulunan embriyolar Hanks solusyonu içeren steril petri kabına konur. Bu aşamadan sonraki tüm işlemler Laminar-air flow kabinde ve steromikroskop altında gerçekleştirilir. Uterus kası antimezometrial kenar boyunca kesilir. Desidual doku ve sonra da embriyonun Reicherts membranı çıkartılır Embriyo medium içeren petri kabına konur. Sağlam embriyolar beşerli gruplara ayrılır ve içerisinde 5ml sıçan serumu bulunan 50 ml’lik cam kültür şişelerine konur. Embriyo bulunan şişelere O2, CO2, ve N2 gaz karışımı 1dk süreyle verilir. Kültür şişeleri dakikada yaklaşık 30 devirle insert ignore into journalissuearticles values(30rpm/dk); dönen 37°C’ lik roller inkübatöre periyodundan sonra 11,5 günlük embriyoların gelişimi 17 embriyonik tomurcuğun gelişimini içeren Morfolojik Skorlama Sistemine göre morfolojik olarak değerlendirilirKeywords : Embriyo kültürü, morfolojik skorlama, sıçan