Cloning, Expression and Characterization of Xylanase (xyn-akky1) from Bacillus subtilis in Escherichia coli

Authors : Sema BİLGİN, Yakup ULUSU, Hülya KUDUĞ, İsa GÖKÇE

Pages : 1508-1517

Doi:10.16984/saufenbilder.327153

View : 27 | Download : 10

Publication Date : 2018-12-01

Article Type : Research Paper

Abstract :  Bu çalışmada, Bacillus subtilis akky1 straini Türkiye’nin Ordu İli’nin Akkuş ilçesindeki kayın ormanından alınan topraktan izole edilmiştir. akky1 straini 16S rRNA analizi ile tanımlanmıştır. 16S rRNA dizisi Bacillus subtilis strain B7 insert ignore into journalissuearticles values(KC310823.1); ile %100’lük bir benzerlik göstermiştir. GenBank’da verilen Bacillus subtilis ksilanazına ait gen dizisi esas alınarak tasarlanan primerler kullanılarak genomic DNA’dan 642 bp’lik bir DNA fragmenti elde edilmiştir. Ksilanazı kodlayan gen, pET28b insert ignore into journalissuearticles values(+); ekspresyon vektörüne klonlanmış ve Escherichia coli BL21 insert ignore into journalissuearticles values(DE3);’de ekpresse edilmiştir. Rekombinant olarak üretilen protein nikel afinite kromatografisi ile saflaştırılmış ve ksilanaz aktivitesi belirlenmiştir. Saflaştırılan ksilanazın moleküler ağırlığı SDS-PAGE ile 26.0 kDa olarak belirlenmiştir. Rekombinant enzimin optimum pH’sı 6.0 ve sıcaklığı 60°C, Km değeri ise 3.33 mg/ml olarak tespit edilmiştir.   
Keywords : Bacillus subtilis, Ksilanaz, Rekombinant Protein, Endüstriyel Enzimler, Escherichia coli