İnsan İnsülin Hormonu Öncülerinin Pichia pastoris AOX1 Promotoru Altında Klonlanması, Ekspresyonu ve Biyoreaktörde Üretimi

Authors : Aysun TÜRKANOĞLU ÖZÇELİK, Ayşe TORUN, Semiramis YILMAZ, Mehmet İNAN

Pages : 1190-1196

Doi:10.19113/sdufenbed.472329

View : 19 | Download : 12

Publication Date : 2018-09-20

Article Type : Research Paper

Abstract :Normal 0 21 false false false TR X-NONE X-NONE /* Style Definitions */ table.MsoNormalTable {mso-style-name:`Normal Tablo`; mso-tstyle-rowband-size:0; mso-tstyle-colband-size:0; mso-style-noshow:yes; mso-style-priority:99; mso-style-parent:``; mso-padding-alt:0cm 5.4pt 0cm 5.4pt; mso-para-margin-top:0cm; mso-para-margin-right:0cm; mso-para-margin-bottom:10.0pt; mso-para-margin-left:0cm; line-height:115%; mso-pagination:widow-orphan; font-size:11.0pt; font-family:`Calibri`,`sans-serif`; mso-ascii-font-family:Calibri; mso-ascii-theme-font:minor-latin; mso-hansi-font-family:Calibri; mso-hansi-theme-font:minor-latin; mso-bidi-font-family:`Times New Roman`; mso-bidi-theme-font:minor-bidi;} İnsülin pankreasın beta hücrelerinden üretilen ve vücutta glukoz dengesini sağlayan önemli bir peptit hormondur. Pankreasın yeterli miktarda insülin üretememesi ya da hücrelerin üretilen insüline cevap verememesi sonucu kan glukoz düzeyinin yükselmesiyle diyabet adı verilen metabolik bir hastalık meydana gelir. Günümüzde bu hastalığın tedavisinde insülin hormonu kullanılmaktadır. İnsülin hormonu genetik mühendisliği teknikleri kullanılarak rekombinant olarak üretilen ilk proteindir. İlk olarak Escherichia coli ve Saccharomyces cerevisiae ’da üretilmeye başlanmış, ancak son zamanlarda rekombinant insülin üretiminde Pichia pastoris insert ignore into journalissuearticles values( Komagataella phaffi ); ’in   kullanımı yaygınlaşmıştır. Bu çalışmada, insan insülin hormonu öncülerinin insert ignore into journalissuearticles values(IP); P. pastoris ’in metanol ile indüklenebilir AOX1 promotoru altında üretimini sağlamak amacıyla; bu proteini kodlayan DNA fragmenti transformasyon ve ligasyon gibi moleküler biyoloji teknikleri kullanılarak plazmide aktarılarak istenen proteini kodlayan bir ekspresyon vektörü elde edilmiştir. Ekspresyon vektörünün lityum asetat yöntemiyle yetenekli hale getirilen P. pastoris X33 suşuna elektroporasyonla transferi sağlanmıştır. 5L ölçekli biyoreaktörde yapılan protein ekspresyonu çalışması sonrasında alınan örnekler SDS-PAGE ve ELISA yöntemleriyle analiz edilmiş ve 7.5 mg/L IP proteini üretildiği tespit edilmiştir.
Keywords : İnsülin, Pichia pastoris, AOX1 promotoru, Rekombinant protein