Optimization of the Immobilization Conditions of Horseradish Peroxidase on TiO2-COOH nanoparticles by Box-Behnken Design

Authors : Selmihan ŞAHİN

Pages : 904-916

Doi:10.19113/sdufenbed.557021

View : 38 | Download : 10

Publication Date : 2019-12-25

Article Type : Research Paper

Abstract :Bu çalışmada, TiO 2 nanopartiküller hazırlandı ve 3-insert ignore into journalissuearticles values(3,4-dihidroksifenil); propiyonik asit ile –COOH fonksiyonelleştirildi. FTIR, TEM, EDS ve XRD ile nanopartiküllerin karakterizasyonu gerçekleştirildi. HRP elde edilen nanopartiküllerin üzerine EDC/NHS bağlama yolu ile immobilize edildi. A: enzim konsantrasyonu insert ignore into journalissuearticles values(0.5-1.5 mg/mL);, B: immobilizasyon pH’sı insert ignore into journalissuearticles values(4.0-8.0);, C: immobilizasyon sıcaklığı insert ignore into journalissuearticles values(4-50°C);, D: immobilizasyon süresi insert ignore into journalissuearticles values(1-20 h);’ni içeren HRP’nin immobilizasyon koşulları yanıt yüzey yöntemi ve Box-Behnken dizayn kullanılarak optimize edildi. Optimize edilen immobilizasyon koşulları, immobilize HRP aktivitesi için 0.5 mg/mL HRP, pH 5.5, 40 °C ve 8 saat, protein bağlama verimi insert ignore into journalissuearticles values(%); için 1.5 mg/mL HRP, pH 4, 18°C ve 20 saat olarak belirlendi. Bu immobilizasyon koşullarında immobilize HRP için elde edilen deneysel değer 80.39 U ± 1.06 iken, protein bağlama verimi 94.25 ± 3.58%’dir. Bunun dışında serbest ve immobilize enzimin optimum sıcaklık ve pH değeri sırasıyla 50°C ve 4.0; 50°C ve 3.5 olarak belirlendi. 4°C’de 10 gün saklama sonunda immobilize HRP’nin başlangıç aktivitesinin %52’si kalmıştır. Ayrıca immobilize HRP 6 kez arka arakaya kullanım sonucunda başlangıç aktivitesinin %48’ini sürdürmüştür. 
Keywords : İmmobilizasyon, Horseradish peroksidaz, TiO2 nanopartiküller, EDC NHS bağlama, Karboksil grubu fonksiyonelleştirmesi

ORIGINAL ARTICLE URL