Aspergillus niger Katalazının Üretimi, Üçlü-Faz Ayırma ile Saflaştırılması ve Biyokimyasal Karakterizasyonu

Authors : Eda BAYKAL SARI, Yonca YÜZÜGÜLLÜ KARAKUŞ

Pages : 12-24

Doi:10.19113/sdufenbed.559988

View : 19 | Download : 12

Publication Date : 2020-04-20

Article Type : Research Paper

Abstract :Bu çalışmada Aspergillus niger katalazının üretimi, saflaştırılması ve karakterize edilmesi amaçlanmıştır. Buna göre 1 litrelik YpSs sıvı büyüme ortamında 37°C ve 155 rpm çalkalama hızında büyütülen A. niger’den 7. günde ham enzim ekstraktı elde edilmiştir. Katalaz enzimi üçlü-faz ayırma insert ignore into journalissuearticles values(TPP); tekniği ile saflaştırılmıştır. Bunun için %80 insert ignore into journalissuearticles values(w/w); amonyum sülfat içeren ve ham ekstrakt:t-butanol oranı 1:1.5 olacak şekilde pH 7.0’da hazırlanan sistemden enzim %263 verim ile 7.9 kat saflaştırılmıştır. Km değeri insert ignore into journalissuearticles values(21.4 mM);, optimum reaksiyon sıcaklığı insert ignore into journalissuearticles values(50°C); ve optimum reaksiyon pH’sı insert ignore into journalissuearticles values(6.0); belirlenmiştir. Kararlılık testleri, enzimin geniş pH insert ignore into journalissuearticles values(4.0-9.0); aralığında dayanıklı kalabildiğini göstermiştir. Ayrıca katalaz aktivitesinin %7.5’lik insert ignore into journalissuearticles values(v/v); etanol varlığında yaklaşık %77’sinin korunduğu gözlenmiştir. Bununla birlikte, esas fonksiyonunun yanında 4-metil katekol ve katekol gibi fenolik bileşikleri peroksitten bağımsız olarak okside edebilmiştir. Sonuç olarak, A. niger’den katalaz enziminin geleneksel kromatografi yöntemi yerine zamandan tasarruf sağlayan, maliyeti ucuz ve kullanımı oldukça kolay olan üçlü faz sistemleri ile saflaştırılabildiği görülmektedir. Enzimin sahip olduğu biyokimyasal özellikleri insert ignore into journalissuearticles values(pH ve etanol kararlılığı ve ikincil oksidaz aktivite varlığı);, çeşitli endüstriyel uygulama alanlarında avantaj sağlayabilir.
Keywords : Aspergillus niger, Katalaz, Üçlü faz ayırma sistemi, Oksidaz, Peroksidaz