BUĞDAYDA POLİMERAZ Zİ CİR REAKSİYO U

Authors : Ahmet YILDIRIM, Nejdet KANDEMİR, Özlem ATEŞ SÖNMEZOĞLU, Tuğba GÜLEÇ

Pages : 36-39

Doi:10.7161/anajas.2011.26.1.36-39

View : 25 | Download : 18

Publication Date : 2011-02-16

Article Type : Other Papers

Abstract :Polimeraz Zincir Reaksiyonu (PCR) DNA polimeraz enzimi aracılığıyla suni şartlarda DNA’nın çoğaltılması işlemidir. Yaygın ve geniş bir kullanım alanı olan PCR, moleküler çalışmalara büyük bir hız ve kesinlik kazandırmıştır. Oldukça kompleks olan bu teknik optimize edilerek başarılı bir şekilde kullanıldığında araştırmacıların işini kolaylaştırmaktadır. Ancak zayıf, istenmeyen ve spesifik olmayan ürün oluşumundan kaçınmak için kullanıcı gereken optimum konsantrasyon ve şartları kendisi ayarlamalıdır. Bu çalışma, PCR’de kullanılan temel bileşenlerden DNA, MgCl2, dNTP ve primer konsantrasyonlarının optimize edilmesi ve karşılaşılan sorunların ortaya konulması amacıyla yapılmıştır. Bu bileşenler PCR sonucunu etkileyen kritik faktörlerdir. Diğer bileşenler sabit tutularak her bir bileşen için farklı konsantrasyonlar denenmiş ve doğru amplifikasyon için gerekli optimum konsantrasyonların DNA (100 ng), MgCl2, dNTP ve primer için sırasıyla 1 µl, 2-2.25 mM, 200-400 µM ve 0.25 µM olduğu saptanmıştır. Ayrıca reaksiyon karışımına mineral yağ koymanın PCR ürününe etkisinin bulunmadığı da tespit edilmiştir
Keywords : Polimeraz Zincir Reaksiyonu, PCR, DNA, MgCl2, dNTP, Primer, Optimizasyon