Characterization of a Thermally Stable β-galactosidase Produced by Thermophilic Anoxybacillus sp. AH1

Authors : Ömer ACER, Fatma MATPAN BEKLER

Pages : 130-136

Doi:10.46810/tdfd.835632

View : 53 | Download : 13

Publication Date : 2021-06-25

Article Type : Research Paper

Abstract :Termofilik bakterilerden elde edilen termostabil β-galaktosidazlar, endüstriyel ve biyoteknolojik uygulamalarda çeşitli avantajlara sahip oldukları için ilgi çekmektedir. Bu çalışmada, Anoxybacillus sp. AH1`den üretilen, oldukça termostabil olan β-galaktosidaz, saflaştırıldı ve karakterize edildi. En yüksek enzim üretimi, bakterinin 24 saat inkübe edilmesinden sonra elde edildi. Enzim, amonyum sülfat çöktürmesi, diyaliz ve jel filtrasyon kromatografisi insert ignore into journalissuearticles values(Sephadex G-75); kullanılırak saflaştırıldı. Saflaştırma aşamalarından sonra, β-galaktosidazın % 13,9 verimle 10,2 kata kadar saflaştırıldığı tespit edildi. β-galaktosidazın moleküler kütlesi, SDS-PAGE ile 75 kDa olarak tahmin edildi. Saflaştırılmış enzimin oldukça stabil olduğu ve 120 dakika sonunda 60 ° C`de orijinal aktivitenin% 71`ini, 70 ° C`de ise % 53`ünü koruduğu tespit edildi. Saflaştırılmış β-galaktosidazın Km ve Vmax değerleri sırasıyla 1,249 mM ve 0,5 μmol dakika-1 olarak hesaplandı. Ca2+, Zn2+ ve Mg2+ β-galaktosidaz aktivitesini önemli ölçüde aktive ederken, Cu2+ ve metal iyon şelatörleri, 1,10-phenanthroline insert ignore into journalissuearticles values(phen); ve ethylenediaminetetraacetic acid insert ignore into journalissuearticles values(EDTA); enzim aktivitesini önemli ölçüde inhibe etmiştir. Saflaştırılmış β-galaktosidaz aktivitesi 2 mM PMSF insert ignore into journalissuearticles values(phenylmethylsulfonyl fluoride);, PCMB insert ignore into journalissuearticles values(p-chloromercuribenzoic acid);, DTT insert ignore into journalissuearticles values(dithiothreitol);, ve β-ME insert ignore into journalissuearticles values(β-mercaptoethanol); ile artar iken, 1 mM NEM insert ignore into journalissuearticles values(N-ethylmaleimide); ile tamamen inhibe edildiği belirlendi.
Keywords : enzim aktivitesi inhibisyonu, termostabil b galaltosidaz, enzim saflaştırma, Anoxybacillus sp AH1

ORIGINAL ARTICLE URL