The Basic Experimental Setup for the Vacuum-assisted, Agrobacterium-mediated Transient Expression in Tomato

Authors : Cansu BÜLBÜL, İnanç SOYLU, Selcen DOĞAN, Sevilay Münire GİRGİN, Nedim MUTLU

Pages : 97-106

Doi:10.30910/turkjans.1112981

View : 38 | Download : 25

Publication Date : 2023-01-28

Article Type : Research Paper

Abstract :Hedef genleri bitkilere aktarmak için çeşitli yöntemler kullanılmaktadır. Bunlardan, Agrobacterium aracılı transformasyonda, bitkiye genler kalıcı olarak ikili vektör sistemi ile aktarılabilmektedir. Ancak bu yöntem ile transgenik bir bitki elde etmek için birkaç aylık bir zamana ihtiyaç duyulduğu düşünüldüğünde, süreç oldukça yoğun iş gücü, emek ve zaman gerektirmektedir. Geçici gen ekspresyonu insert ignore into journalissuearticles values(örn., vakum-infiltrasyon); sistemleri, özellikle zamanla ilgili dezavantajların üstesinden gelmek için, kalıcı transformasyona alternatif olarak kullanılabilmektedir. Ancak bu yöntemde, vakum odaları gibi pahalı ekipmanlara ihtiyaç duyulmaktadır. Bu çalışmada, domates fidelerinde bir raportör gen olan modifiye yeşil floresan proteinin insert ignore into journalissuearticles values(mGFP); geçici ifadesini gösteren bir vakum-infiltrasyon protokolü rapor edilmektedir. Çalışma sonucunda, uygun fiyatlı ekipmana sahip temel bir deney düzeneği insert ignore into journalissuearticles values(özel yapım bir büyüme odası dahil); ile 6 dakika boyunca ve sadece 200 milibarlık bir vakum uygulanarak tüm yaprağa ilgili geni taşıyan Agrobacterium solüsyonunun infiltre edilebileceği, böylece domateste geçici gen ifadesinin sağlanabileceği gösterilmiştir. Sonuç olarak, T-DNA, PCR ile tespit edilmiş, mGFP\`nin varlığı hem SDS-page analizi ile analitik olarak hem de floresan mikroskobu ile görsel olarak belirlenmiştir.
Keywords : Bitkide geçici gen ifadesi, vakum infiltrasyonu, Agrobacterium aracılığıyla gen aktarımı, Solanum lycopersicum

ORIGINAL ARTICLE URL