Purification and characterization of an esterase from larval Diplolepis fructuum (Rübsaamen, 1895) (Hymenoptera: Cynipidae)

Authors : Mazen ALTHALJI, Salih GÖRGÜN

Pages : 367-376

Doi:10.16970/entoted.533752

View : 26 | Download : 13

Publication Date : 2019-12-01

Article Type : Research Paper

Abstract :Diplolepis fructuum  insert ignore into journalissuearticles values(Rübsaamen, 1895); insert ignore into journalissuearticles values(Hymenoptera: Cynipidae); Rosaceae türlerinde zararlara yol açan en önemli böcek türlerinden birisidir. Biyokimyasal veri elde etmek için Cumhuriyet Üniversitesi, Fen Fakültesi, Biyokimya Anabilim Dalı laboratuvarında 2018 yılında başlatılan bu çalışma ile  D. fructuum ’un larvasından bir esteraz insert ignore into journalissuearticles values(EC 3.1.1.X); Q Sefaroz anyon değişim, fenil Sefaroz CL-4B ve Sefakril S 100 HR jel filtrasyon kromatografisini kullanarak saflaştırılmıştır. Enzim 6.94 U/mg protein spesifik aktivite, yaklaşık 29 kat saflık ve %8.80 verime sahipti. Nativ-PAGE çalışmalarında sadece bir aktivite bandı gözlenmiştir. Nativ-PAGE ve SDS-PAGE tekniklerini kullanarak, esterazın molekül kütlesi yaklaşık olarak 60 kDa olarak tahmin edilmiştir. Kinetik datadan, enzimin optimum sıcaklık ve pH’ı sırasıyla 40 º C ve 9.0 olarak belirlenmiştir. Enzim, 40 º C ve pH 8.0’da 4 saat kararlıydı. 4 nitrofenil butirat insert ignore into journalissuearticles values(p-NPB); substrat olarak  kullanılarak, K m  ve V max  değerlerinin 0.035 mM and 1.41 µmol/mL.dk olduğu bulunmuştur. Enzim en yüksek aktivitesini p-NPB insert ignore into journalissuearticles values(%100); ve 4-nitrofenil asetat insert ignore into journalissuearticles values(%52); üzerinde sergilemiştir. Tüm bu veriler, enzimin diğer böcek türlerinden bildirilen esterolitik enzimlerden farklı kinetik özellik ve molekül kütlesi ile klasik bir esteraz olabileceğini göstermektedir.
Keywords : Kolon kromatografisi, Diplolepis fructuum, esteraz, larva, saflaştırma