Determining the analytical sensitivity of polymerase chain reaction targeting Ehrlichia spp. disulfide oxidoreductase gene: Molecular diagnosis of ehrlichiosis in a dog clinically suspected with leishmaniasis

Authors : Muhammet KARAKAVUK, Mehmet AYKUR, Hüseyin CAN, Aysu DEĞİRMENCİ DÖŞKAYA, Hande DAĞCI, Adnan GÜRÜZ, Mert DÖŞKAYA

Pages : 28-36

Doi:10.33188/vetheder.955964

View : 18 | Download : 10

Publication Date : 2022-01-15

Article Type : Research Paper

Abstract :Ehrlichia spp. insan ve hayvanları enfekte edebilen kene kaynaklı zoonotik patojenlerdir. Günümüzde hastalığın tanısında kullanılan testler arasında yüksek duyarlılık ve özgünlüğe sahip olan moleküler yöntemlerin önemi giderek artmaktadır. Bu çalışmanın amacı Ehrlichia spp. disülfid oksiredüktaz insert ignore into journalissuearticles values(DSB); genini hedefleyen konvansiyonel polimeraz zincir reaksiyonunun insert ignore into journalissuearticles values(PZR); analitik hassasiyetinin belirlenmesidir. Öncelikle Ehrlichia spp. DSB geni TOPO vektörüne klonlanmıştır. DSB geni içeren TOPO plazmidi seri olarak sulandırıldıktan sonra Ehrlichia spp. DSB genini hedefleyen PCR gerçekleştirilmiştir. Bu araştırma üzerinde çalışmalar sürerken, klinik olarak leishmaniasis şüphesi bulunan ve leishmaniasis tedavisi alan bir sokak köpeğinin kan ve deri kazıntı örnekleri laboratuvarımıza gelmiştir. Sokak köpeğine ait kan ve deri kazıntı örneklerinde patojeni belirlemek amacıyla Ehrlichia spp. DSB ve 16S rRNA ile Leishmania spp. kinetoplast DNA insert ignore into journalissuearticles values(kDNA); genlerini hedef alan PCR testleri yapılmıştır. DSB geni içeren seri sulandırılmış TOPO plazmidi kullanılarak yapılan Ehrlichia spp. DSB genini hedefleyen PCR testinin analitik hassasiyeti, 1 ≥ kopya plazmit/reaksiyon olarak tespit edilmiştir. Klinik olarak leishmaniasis şüphesi bulunan sokak köpeğinin kan ve deri kazıntı örneklerinde Ehrlichia spp. DSB genini hedefleyen PCR pozitif, Leishmania spp. kDNA`yı hedefleyen PCR testleri negatif olarak tespit edilmiştir. Ehrlichia spp. 16S rRNA`yı hedefleyen nested PCR testi ile, sokak köpeğinin kan ve deri kazıntı örneklerinde E. canis olarak tanımlanmıştır. Bu çalışmada Ehrlichia spp. DSB genini hedefleyen PCR`nin yüksek duyarlılığa sahip olduğu gösterilmiştir. Ayrıca moleküler yöntemlerin klinisyenlere ehrlichiosis ve leishmaniasis ayırıcı tanısında uygunsuz tedaviyi önlemede yardımcı olabileceği öngörülmüştür.
Keywords : Disülfit oksiredüktaz, Ehrlichia canis, Ehrlichiosis, PCR, Leishmaniasis