THE USE OF AN INTERNAL STANDARD MOLECULE FOR DETERMINING MUTATION FREQUENCY IN RESTRICTION SITE MUTATION METHOD

Authors : Sinan SÜZEN, James M PARRY

Pages : 1-13

Doi:10.1501/Eczfak_0000000328

View : 21 | Download : 12

Publication Date : 1999-06-01

Article Type : Research Paper

Abstract :Spesifik DNA kısımlarının polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) kullanarak in vitro çoğaltılması üzerine değişkenlerin etkisi ile ilişkili bazı problemleri gidermek için, iç standart tekniği sınırlı bölge mutasyon (RSM) metoduna katıldı. İç standart, eksilme dışında hedef dizilim ile aynı nükleotid diziliminde dizayn edildi. Böylece büyüklükteki farklılıklar hedef ve iç standart'ın ayırımı için kullanılabildi. RSM tekniğinde iç standart kullanımının uygulaması sıçan ras geninde gerçekleştirildi. N-metil-N-nitrozaüre (MNU) ile indüklenmiş mutasyonlar 10-5 sıklıkla Hras geni ekson 1 'de HindIII restriksiyon enzim tanıma bölgesinde saptandı. İç standart kullanımı mııtasyon sıklığının hesaplanmasına başarılı bir şekilde olanak sağladı.
Keywords : iç standart, ras, PCR, RSM