Immobilization and Characterization of Trypsin on TiO2 Nanoparticles Activated with Crosslinkers

Authors : Selmihan ŞAHİN, İsmail ÖZMEN

Pages : 274-283

Doi:10.21541/apjes.782896

View : 15 | Download : 1

Publication Date : 2021-05-28

Article Type : Research Paper

Abstract :Tripsinin insert ignore into journalissuearticles values(TRP); amino grubu ile fonksiyonelleştirilmiş silika kaplı TiO2 nanopartiküller insert ignore into journalissuearticles values(ASTiNP\`ler); üzerine farklı çapraz bağlayıcılar insert ignore into journalissuearticles values(1,4-fenilen diizotiyosiyanat insert ignore into journalissuearticles values(PDC);, 1,3-fenilen diizotiyosiyanat insert ignore into journalissuearticles values(MDC);, glutaraldehit insert ignore into journalissuearticles values(GA); ile ya da çapraz bağlayıcılar olmadan immobilizasyonu çalışılmıştır. ASTiNP\`ler ve çapraz bağlayıcılarla modifiye edilmiş ASTiNP\`ler FTIR ve TEM ile karakterize edilmiştir. ASTiNP\`ler üzerine immobilize edilen TRP’nin spesifik aktivitesi incelendiğinde, GA ile bağlı TRP’nin daha yüksek spesifik aktivite göstermiştir. Ancak PDC çapraz bağlayıcı olarak kullanıldığında immobilizasyon verimi insert ignore into journalissuearticles values(%); ve yükleme kapasitesi diğer çapraz bağlayıcılardan daha yüksektir. TRP immobilizasyonu için çapraz bağlayıcıların optimum konsantrasyonu 20,8 µM PDC, 5,2 µM MDC ve %1,5 v/v GA olarak belirlenmiştir. Çağraz bağlayıcı olmadan immobilize edilen TRP, dört tekrar kullanım sonucunda başlangıç aktivitesinin %5\`ini gösterirken GA ile immobilize edilen TRP, 7 tekrar kullanım sonucunda ilk aktivitesinin % 7\`sini, ve MDC ve PDC bağlı TRP 10 tekrar kullanım sonucunda başlangıç aktivitesinin sırasıyla % 7\`sini ve % 11\`ini sürdürmüştür. Cyt C\`nin immobilize TRP ile parçalanması, LC-MS/MS analizi ile değerlendirilmiştir. Çapraz bağlayıcı ile ASTiNP\`ler üzerine immobilize edilen TRP, çapraz bağlayıcı olmadan ASTiNP’ler üzerine immobilize edilen TRP ile karşılaştırıldığında daha yüksek Cyt C parçalama verimliliği göstermiştir. Sonuç olarak, PDC ile ASTiNP\`ler üzerine immobilize edilen TRP; Cyt C parçalama verimliliği, immobilizasyon verimi, yükleme kapasitesi, katalitik aktivite ve tekrar kullanılabilirlik açısından daha iyi sonuçlar vermiştir.
Keywords : tripsin, immobilizasyon, silika kaplama, çapraz bağlayıcı, amin fonksiyonelleştirmesi