Three-Phase Partitioning of α-Galactosidase from Aspergillus lentulus: Optimization of System and Characterization of Enzyme

Authors : Derya ÇAMURLU, Hasan BAYRAKTAR, Sennur ÇALIŞKAN, Ataç UZEL, Seçil ÖNAL

Pages : 83-98

Doi:10.15671/hjbc.511731

View : 19 | Download : 8

Publication Date : 2020-04-17

Article Type : Research Paper

Abstract :Üçlü-faz ayırma insert ignore into journalissuearticles values(TPP); tekniği α-galaktozidazın Aspergillus lentulus ’dan tek adımda kısmi saflaştırılması için ilk kez başarıyla kullanıldı. Yüksek aktivite ve saflaştırma katı elde etmek için enzimin ekstraksiyon etkinliğine amonyum sülfat konsantrasyonu, ekstrakt t-butanol oranı ve pH etkisi araştırıldı. Sistemin optimum saflaştırma parametreleri %55insert ignore into journalissuearticles values(w/v); amonyum sülfat konsantrasyonu, 1:1 insert ignore into journalissuearticles values(v/v); ham ekstrakt t-butanol oranı ve pH 5.5 olarak belirlendi. Bu optimize TPP sistemi α-galaktosidaz için 5.3 saflaştırma katı ile %178 aktivite verimi oluşturdu. pH 6.5 ve 50 o C’de maksimum aktivite gözlendi. α-Galaktozidaz 25-60°C sıcaklık aralığında ve pH 2.6-5.5 aralığında oldukça iyi bir kararlılık gösterdi. K M ve V max değerleri sırasıyla 0.365 mM ve 0.093 U olarak belirlendi. Metal iyonları ve şekerler arasında Na 2 CO 3 ve galaktoz enzim aktivitesi üzerinde kuvvetli inhibitor etkisi gösterdi. TPP ile A. lentulus’ dan farklı biyokimyasal özelliklere sahip yeni bir α-galaktozidazın elde edilmesi onun çeşitli biyoteknolojik uygulamaları açısından ilgi çekici olacaktır. 
Keywords : α galactosidase, bioseparation, three phase partitioning TPP, enzyme purification