Affinity Separation and Characterization of IgG Subfragments by Fast Protein Liquid Chromatography with HiTrap_r Protein A Column

Authors : Gizem ERTÜRK, Nilay BERELİ, Lokman UZUN, Aşkın TÜMER

Pages : 133-138

View : 34 | Download : 7

Publication Date : 2011-04-01

Article Type : Research Paper

Abstract :Antibadi moleküllerinin proteolitik enzimlerle alt birimlerine parçalanabildiği bilinmektedir. Bu alt birimler, antibadilerin yapısı ve işlevlerinin belirlenmesi çalışmalarında önemli veriler sunmaktadır. Deneysel uygulamalarda ve immünokimyasal teknikler için antibadi alt birimleri, parçalanmamış bütün antibadi moleküllerine göre önemli avantajlar sunmaktadır. Alt birimlerin boyutları daha küçüktür, kimyasal ve fiziksel dirençleri daha yüksektir. Sunulan çalışmada, insan immunoglobulin G parçalanması için papain kullanılmıştır. Elde edilen alt birimler, hızlı protein sıvı kromatografisi FPLC sistemi ile ayrılmıştır. Bu amaç için GE Healthcare HiTrap_r Protein A FF kolon kullanılmış, ayırıcılık Rs ve teorik plaka sayısı N hesaplanmıştır. Kolona tutunan ve tutunmayan alt birimler, FPLC sisteminin Frac 920 fraksiyon toplama birimi ile toplanmış ve enzim-bağlı immünosorbent kit ELISA ve sodyum dodesil sülfat-poliakrilamid jel elektroforez SDS-PAGE yöntemleri ile karakterize edilmiştir
Keywords : Antibadi parçalanması, Fab fragmanı, Fc fragmanı, FPLC, Protein A kolon