Purification of Glutathione S-Transferase From Bonito Sarda Sarda Liver And Investigation of Metal Ions Effects on Enzyme Activity

Authors : Uğur GÜLLER, Pınar TAŞER, Mehmet ÇİFTCİ, Ömer İrfan KÜFREVİOĞLU

Pages : 435-442

View : 33 | Download : 7

Publication Date : 2014-09-01

Article Type : Research Paper

Abstract :G lutatyon S-transferaz GST, EC. 2.5.1.18 elektrofilik merkeze sahip hidrofobik bileşiklerin glutatyonla GSH konjugasyonunu katalizler. Sunulan bu çalışmada GST enziminin palamut karaciğerinden ilk kez saflaştırılması ve bazı metal iyonların enzim aktivitesi üzerine etkilerinin araştırılması amaçlanmıştır. Saflaştırma işlemi homojenatın hazırlanması ve glutatyon-agaroz afinite kromatografisi olmak üzere iki basamakta gerçekleştirildi. Enzimin saflığı SDS-PAGE ile kontrol edildi ve elektroforezde çift bant görüldü. Enzimin heterodimer yapıya sahip olduğu bulundu. Ayrıca bazı metal iyonların enzim aktivitesi üzerine etkileri incelendi. İnhibisyon etkisi gösteren metal iyonlar için IC değerleri % aktivite-[metal iyon] grafiğinden hesaplandı ve Ki sabitleri ve inhibisyon türleri Lineweaver-Burk grafiği kullanılarak belirlendi. Pb+2, Cr+2 ve Fe+3iyonları enzim aktivitesini etkilemediği, Co+2 iyonunun enzimi aktive ettiği, Ag+, Cu+2, Cd+2 ve Zn+2 inhibisyon etkisi gösterdiği bulundu. İnhibisyon sırası 0,166±0,046 µM; 14,6± 4,7 µM; 88,3±33,5 µM ve 1390±440 µM Ki sabitleriyle, Cu+2>Ag+>Cd+2>Zn+2 olarak bulundu. Bu metallerin hepsinin enzimi yarışmasız olarak inhibe ettiği tespit edildi
Keywords : Glutatyon S transferaz, saflaştırma, palamut, metal iyonları

ORIGINAL ARTICLE URL