High-Level Production of MMLV Reverse Transcriptase Enzyme in Escherichia Coli

Authors : Özlem KAPLAN, Rizvan İMAMOĞLU, İsa GÖKÇE

Pages : 549-555

Doi:10.7240/jeps.877806

View : 13 | Download : 8

Publication Date : 2021-12-30

Article Type : Research Paper

Abstract :Moloney murin lösemi virüs insert ignore into journalissuearticles values(MMLV); ters transkriptazı insert ignore into journalissuearticles values(RT);, cDNA sentezi ve RNA amplifikasyonu için en yaygın kullanılan enzimdir. Bu çalışmada moleküler çalışmalardaki önemi nedeniyle MMLV RT enziminin rekombinant olarak üretilmesi amaçlanmıştır. Bu bağlamda, MMLV RT enzimini kodlayan DNA fragmanı pTOLT plazmidine klonlanmış ve E. coli BL21 insert ignore into journalissuearticles values(DE3); pLysE hücrelerinde eksprese edilmiştir. Proteinin yüksek düzeyde ekspresyonu, protein moleküllerinin inklüzyon cisimciklerinde toplanmasına neden olduğundan MMLV RT proteininin çözünür formda elde edilebilmesi için MMLV RT ve şaperon plazmidlerin insert ignore into journalissuearticles values(pG-KJE8, pGro7, pKJE7, pGTf2, pTf16); birlikte ekspresyonu gerçekleştirilmiştir. Beklentilerimizin aksine, protein çözünür formda elde edilemediği için, yeniden katlama prosesi kullanılarak inklüzyon cisimciklerinden geri kazanılmıştır. Son olarak protein, afinite kromatografisiyle saflaştırılmış ve proteinin aktivitesi RT-PCR tekniği kullanılarak kontrol edilmiştir.
Keywords : İnklüzyon cisimcikleri, Moloney murin lösemi virüsü, Ters transkriptaz, cDNA sentezi