The Development of Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) Method for Diagnosis of Viral Hemorrhagic Septicemia (VHS) Disease in Rainbow Trout (Oncorhynchus mykiss, Walbaum)

Authors : Uğur DEĞİRMENCİ, Haşmet ÇAĞIRGAN

Pages : 7-10

Doi:10.35229/jaes.288116

View : 39 | Download : 13

Publication Date : 2017-04-03

Article Type : Research Paper

Abstract :VHS, enfekte balık dokusundaki virüsün, duyarlı doku kültürlerinde izolasyonundan sonra ELISA, virüs nötralizasyon, immunofloresans, immunoperoksidaz ve komplement fiksasyon gibi serolojik testlerle teşhis edilmektedir. ELISA, tekrarlanabilir olması, kullanımının basit olması, çabuk yapılabilmesi ve ucuz olmasıyla diğer serolojik testlere göre daha çok tercih edilmektedir. Bu çalışmada VHS antijenini tespit edebilecek tavşandan elde edilen sadece bir antikor kullanıldı. Bu antikor biotin ile işaretlenerek testte konjugat olarak kullanıldı. Üretilen antikorun insert ignore into journalissuearticles values(anti-VHSV F1 ɣ-globulin fraksiyonu); protein konsantrasyonu 28 mg/ml olarak ölçüldü. Mikroplak kuyucukları 10 mikrogram/mililitre insert ignore into journalissuearticles values(μg/ml); anti-VHSV ɣ-globulin fraksiyonu ile kaplandı. Daha sonra şüpheli örnek ilave edildi. Örnekteki VHSV biotinlenmiş anti-VHSV ɣglobulin fraksiyonuna bağlandı. Bu aşamadan sonra ilave edilen horse radish peroksidase insert ignore into journalissuearticles values(HRP); enzimi ile işaretli avidin, konjugattaki biotin ile bağlandı. Son olarak tetramethylbenzidine substrat insert ignore into journalissuearticles values(TMB); eklenmesiyle renk şekillendi ve ELISA okuyucuda 450 nonometrede insert ignore into journalissuearticles values(nm); okutturuldu. Bu çalışmada geliştirilen ELISA yöntemi ile bilinen tüm VHSV alttipleri insert ignore into journalissuearticles values(07.71, HE, 23.75); tespit edilebilmektedir. Yine bu yöntem VHSV’ye oldukça spesifiktir ve İnfeksiyöz Hematopoetik Nekrozis Virüsu insert ignore into journalissuearticles values(IHNV);, Pike Fry rhabdovirus insert ignore into journalissuearticles values(PFR);, Perch rhabdovirus insert ignore into journalissuearticles values(PR); ve bilinen tüm İnfeksiyöz Pankreatik Nekrozis Virüsu insert ignore into journalissuearticles values(IPNV); serotipleriyle çapraz reaksiyon vermemektedir. Sonuç olarak geliştirilen bu ELISA yöntemi 80 nanogram insert ignore into journalissuearticles values(ng); virüs proteinini ve DKID50 değeri 104,75/0,1 ml olan virüsü tespit edebilmektedir.
Keywords : ELISA, biotin avitin, alabalık, VHSV

ORIGINAL ARTICLE URL