Cloning and Determination of Kinetic Activity of Thermophilic GCH-I from Anoxybacillus flavithermus DSM 2641T

Authors : Fatih Şaban BERİŞ, Özlem HIZAL, Hakan KARAOĞLU

Pages : 178-183

Doi:10.35229/jaes.1068313

View : 46 | Download : 17

Publication Date : 2022-06-30

Article Type : Research Paper

Abstract :Fenilketonüri insert ignore into journalissuearticles values(FKU); yenidoğan bebeklerde fenilalanin hidroksilaz enzim eksikliğinin neden olduğu bir hastalıktır ve tedavi edilebilir zihinsel geriliğin en önemli nedenidir. Hastalığın nedenlerinden biri, fenilalanin metabolizmasının metabolik yolundaki PTPS`nin kusurlarından kaynaklanmaktadır. Hastalığın tedavisi mümkün değildir ve kronik hastalarda yaşam boyu tetrahidrobiyopterin yüklemesi yapılır. Bugün, tetrahidrobiyopterin kimyasal olarak sentezlenir. Biyolojik üretim, uzun süre kimyasal sentez, maliyetler ve kimyasal kirleticilere maruz kalma nedeniyle farklı bir bakış açısıdır. Bu nedenle, termofilik A. flavithermus DSM 2641T`den gchI geni PCR yöntemi ile tanımlandı. 603 bp olan gchl genini klonlandı ve açık okuma çerçevesi 200 amino aside sahip olduğu tespit edildi. AfgchI geni, 6xHis etiketleri ile pET28ainsert ignore into journalissuearticles values(+); ekspresyon vektörüne klonlandı ve 1 mM IPTG indüksiyonu ile eksprese etmek için E. coli BL21 insert ignore into journalissuearticles values(DE3);pLys konakçı hücrelerine transforme edildi. Ni-NTA afinite kromatografisi ile saflaştırıldıktan sonra GCH-I’in 24 kDa, optimum pH’sının 8,0 ve optimum sıcaklık isteminin 65C olduğu belirlendi. Optimal koşullar altında GCH-I, Km- ve Vmax- değerleri sırasıyla 243 ± 23,25 μM ve 100,93 ± 3,5 nM/dak/mg protein olarak tespit edildi.
Keywords : A flavithermus DSM 2641T, BH4, GCHI, FKU, Termofilik bakteri

ORIGINAL ARTICLE URL