Cost effective purification of intein based syntetic cationic antimicrobial peptide expressed in cold shock expression system using salt inducible E. coli GJ1158

Authors : K Seetha RAM, M Mary Vijaya KUMAR, S Divya SRİ, N Bhargava RAMUDU, J B PERAVALİ, Kk PULİCHERLA

Pages : 13-19

Doi:10.5799/ahinjs.02.2014.01.0117

View : 17 | Download : 4

Publication Date : 2014-03-01

Article Type : Research Paper

Abstract :Amaç: Sentetik katyonik antimikrobiyal peptid insert ignore into journalissuearticles values(SK-AMP); önemi gittikçe artan ve konvansiyonel antibiyotiklere alternatif olması beklenen terapötik bir moleküldür. Bu çalışmada SK-AMP’yi intein tabanlı bir sistem ile enzimatik parçalanma olmaksızın saflaştırmak amaçlanmıştır.Yöntemler: İntein sekansı pTYB11 vektöründen PZR kullanılarak amplifiye edildi ve inteinin N-terminal ucu SK-AMP ile bağlandı. Oluşturulan bu yapı soğuk şok ekspresyon vektörü MCS bölgesine klonlandı. pCOLDI ve rekombinan peptid kitin afinite kodonundan 50 mM DDT ile ayrılarak enzimatik ayrıştırma olmaksızın toplandı. Daha sonra toplanan peptitin miktarı belirlendi ve saflaştırılan pepitd yapının antimikrobiyal aktivitesi difüzyon yöntemi ile belirlendi.Bulgular: Başlangıçta intein bağlı SK-AMP, IPTG indüklenebilir E. coli BL21insert ignore into journalissuearticles values(DE3); ve tuz indüklenebilir E. coli GJ1158’de bir füzyon protein olarak eksprese edildi. Tuz ile indüklenen E. coli GJ1158’de kitin bağlayan kodonun kullanıldığı tek basamaklı saflaştırma ile 208 mg/L konsantrasyonunda çözünebilir SK-AMP elde edildi. Saflaştırılmış SK-AMP’nin antibakteriyel etkisi hem gram pozitif hem de gram negatif bakterilere karşı gösterildi ve minimum inhibitör konsantrasyonu belirlendi.Sonuçlar: İlk kez çözünebilir SK-AMP tuz ile indüklenebilir E. coli GJ1158’den kitin bağlayan kodon kullanılarak tek basamakta enzimatik ayrışma olmaksızın elde edildi
Keywords : Sentetik katyonik antimikrobiyal peptid, intein sekansı, pCOLDI, kitin bağlayan kodon, E coli BL21

ORIGINAL ARTICLE URL