Plasental Steroidogeneziste Kilit Enzim: 3β-Hidroksisteroid Dehidrogenaz/∆5-4 İzomeraz (3β-HSD)’ın Ökaryon Vektörde Klonlanmış Prob’larla Belirlenmesi

Authors : Gözde RÖZALP, Gerhard SCHULER

Pages : 7-10

View : 17 | Download : 11

Publication Date : 2010-06-01

Article Type : Research Paper

Abstract :3β-hidroksisteroid dehidrogenaz/∆5-4 izomeraz insert ignore into journalissuearticles values(3β-HSD); plasental steroidogenesiz’de kilit enzim olarak kabul edilir. Steroid hormonların oluşumu için, pregnenolon ∆5 ve ∆4 sentez yollarında kullanılan 3β- hidroksisteroid dehidrogenaz/∆5-4 izomeraz insert ignore into journalissuearticles values(3β-HSD);’a ihtiyaç duyar. Çalışmanın amacı, hedef genin, bir ökaryon vektor üzerinde klonlanmasıyla prob elde edilmesi ve in situ hibridizasyonda kullanılabilirliğinin gösterilmesidir. Bu amaçla total RNA izolasyonundan sonra RT-PCR yapıldı. DNA bantları agaroz jelden ayrılarak saflaştırıldı. 3βHSD-DNA’ların E.coli suşuna transformasyonu tamamlandıktan sonra 3βHSD insert içeren vektörden NcoI ve NotI restriksiyon enzimleriyle kesildi. DIG-işaretli cRNA’ların transkripsiyonu sonrasında in situ hibridizasyon yapıldı. Spesifik boyanmalar tek nukleuslu trofoblast hücrelerinde gözlenirken negatif kontrol grubunda boyanma gözlenmedi. Sonuç olarak bir ökaryon vector üzerinde, hedef gen klonlanarak steroidogenik enzimlerin belirlenmesinde kullanılmak üzere, in situ hibridizasyon tekniği için oldukça spesifik prob’lar elde edilmiştir.
Keywords : 3β HSD, plasenta, in situ hibridizasyon