-
Authors : Oya ORUN, Pınar MEGA TİBER
Pages : 123-128
Doi:10.5472/MMJoa.2803.01
View : 53 | Download : 9
Publication Date : 2015-11-28
Article Type : Research Paper
Abstract :Amaç: Dopamin taşıyıcılar insert ignore into journalissuearticles values(DAT); dopaminin sinaptik gerialımından ve böylelikle sinirsel iletinin çabuk sonlanmasından sorumludur. Bu proteinler alışkanlık yapıcı kokain, amfetamin gibi maddelerin de etki merkezlerini oluşturur. Proteinin N-ucunda bulunan Serin 7 ve 12’nin fosforilasyon bakımından kritik amino asitler olduğu bilinmektedir. Bu çalışmada N-ucu ile kokain bağlama bölgesi arasındaki uzaklık, yaban tip ve Ser7/12Asp ve Ser7/12Ala mutantlarında belirlenmiştir. Gereç ve Yöntem: Sarı-floresan protein insert ignore into journalissuearticles values(YFP); ve mutasyonlar DAT’ın N-terminal ucuna 2-aşamalı PCR ile yerleştirilmiştir. Dopamin geri-alım testleri yapılmış ve konfokal mikroskopta verici-ağartma yöntemi ile Förster rezonans enerji transferi insert ignore into journalissuearticles values(FRET); mesafeleri belirlenmiştir. Bulgular: Tüm N-ucundan YFP-etiketlenmiş DAT proteinleri düzgün olarak hücre yüzeyine taşınmıştır. Km değerleri sırasıyla yaban tip, Ser7/12Ala and Ser7/12/Asp mutantları için 0.76, 0.75 ve 1.24 mM olarak saptanmıştır. FRET etkinliği yaban-tip DAT için 0.15 olarak bulunmuş ve FRET uzaklığı 68.4 Å olarak bulunmuştur. Diğer konstraktlarda FRET etkinlikleri negatiftir ve enerji transferi saptanmamıştır. Sonuç: Veriler bize N-ucu bölgesinin kokain bağlama bölgesi ile FRET mesafesinde olduğunu ve kritik serin rezidülerinin mutasyonlarının insert ignore into journalissuearticles values(Ser7/12Asp); bu mesafeyi arttırdığını göstermektedirKeywords : Dopamin taşıyıcı DAT, Kokain bağlama, Förster rezonans enerji transferi FRET, DAT amino terminal, DAT fosforilasyonu
ORIGINAL ARTICLE URL