PARTIAL PURIFICATION AND CHARACTERIZATION OF AN EXTRACELLULAR METALLOPEPTIDASE PRODUCED BY Bacillus amyloliquefaciens FE-K1

Authors : Fundagül EREM, Mehmet İNAN, Barçın KARAKAŞ BUDAK, Muharrem CERTEL

Pages : 47-61

Doi:10.23902/trkjnat.647525

View : 15 | Download : 9

Publication Date : 2020-04-15

Article Type : Research Paper

Abstract :Bu çalışmanın amacı, sünmüş ekmeklerden izole edilen Bacillus amyloliquefaciens insert ignore into journalissuearticles values(Fukumoto); insert ignore into journalissuearticles values(suş FE-K1); ile elde edilen peptidazı saflaştırmak ve karakterize etmektir. Peptidazlar ham enzim çözeltisinden afinite kromatografisi ile % 25 verim ve 1,53 saflaştırma katsayısı ile saflaştırılmıştır. Kısmi olarak saflaştırılmış peptidaz insert ignore into journalissuearticles values(PPPaz); çözeltisinin optimum pH değeri 7,5 olarak tespit edilmiş olup, pH 7,5-8,0 aralığında peptidaz, 37°C’de 2 saat inkübasyonun ardından başlangıç aktivitesini yaklaşık % 90 oranında korumuştur. PPPaz’ın optimum sıcaklığı 60°C’dir. PPPaz’ın yaklaşık molekül ağırlığı 36 kDa olarak belirlenmiştir. PPPaz’ın O-FEN ve EDTA varlığında inaktive olması, enzimin metallopeptidaz olduğunu göstermiştir. Ayrıca 5 mM K+1 ve 5 mM Mn+2, enzimin aktivitesini sırasıyla % 4 ve % 6,15 oranında artırmıştır. Hg+2, Fe+3 ve SDS insert ignore into journalissuearticles values(% 0,1-1,0 w/v); varlığı enzimin inaktivasyonuna neden olurken, % 0,1-1,0 insert ignore into journalissuearticles values(v/v); Triton X-100, Tween 20 ve Tween 80; ve % 1-20 insert ignore into journalissuearticles values(v/v); ksilen, etanol, aseton ve asetonitril varlığında enzim aktivitesini büyük ölçüde korumuştur. PPPaz’ın karakterizasyonu, enzimin bazı organik çözücü ve yüzey aktif maddelerle ile uyumlu nötr bir serin metalopeptidaz olduğunu ortaya çıkarmıştır.
Keywords : Bacillus amyloliquefaciens, metallopeptidase, ropy bread, purification