Rumen Sıvısında İmmuno-Affinite Kolon IAK ve Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi HPLC Kombinasyonu ile Aflatoksinlerin Tayini

Authors : Murat Reis AKKAYA, Ali İhsan ATALAY, Mehmet Ali BAL

Pages : 439-443

View : 25 | Download : 10

Publication Date : 2015-06-01

Article Type : Research Paper

Abstract :Özbilgi/Amaç: Bu çalışmada rumen sıvısında aflatoksin B1, B2, G1, G2 tayini için immuno-affinite kolon ve yüksek performanslı sıvı kromatografisi HPLC kullanılan bir yöntem geliştirilerek laboratuar içi validasyonu yapılmıştır. Materyal ve Metot: Bu amaç için laktasyondaki bir inekten alınan aflatoksin içermeyen rumen sıvısı süzülüp -35ºC’de 24 saat bekletildikten sonra oda sıcaklığına getirilerek kullanılmıştır. Rumen sıvısına değişik konsantrasyonlarda sertifikalı aflatoksin karışım standardı ilave edilerek yapılan çalışmada, metanol-su 70:30/v:v ekstraksiyonu, immuno-affinite kolon ile aflatoksinlerin ekstrakttan ayrılması, metanol ile aflatoksinlerin immuno-affinite kolondan alınması ve floresan detektörlü HPLC ile aflatoksin miktarlarının tespit edilmesi aşamaları gerçekleştirilmiştir. Örneklerin analizi ile elde edilen veriler tespit limiti LOD , ölçüm limiti LOQ , doğrusallık, geri kazanım ve tekrarlanabilirlik gibi metot performans kriterlerinin belirlenmesi için kullanılmıştır. Bulgular ve Sonuç: Araştırmada, aflatoksin B1 için belirlenen tespit limiti, ölçüm limiti ve geri kazanım oranı sırasıyla 0.01 ppb, 0.02 ppb ve % 91 olarak bulunmuştur. Tekrarlanabilirlik çalışmasında ise 1 ve 2 ppb konsantrasyonlar için varyasyon katsayıları % 3.15 ve % 4.56 olarak hesaplanmıştır. Rumen sıvısında aflatoksinlerin tayini için belirlenen bu performans kriterleri ile doğru ve güvenilir bir şekilde analiz yapılabilir.
Keywords : Aflatoksin, HPLC, İmmuno affinite kolon, Rumen sıvısı