MALDI-TOFMS ile iki türdeş (Leiurus abdullahbayrami Buthidae) akrep zehirindeki peptit ve proteinlerin karşılaştırmalı analizi

Authors : Yasemin NUMANOĞLU ÇEVİK, Mehmet Ali KANAT

Pages : 186-194

Doi:10.46309/biodicon.2022.1095531

View : 39 | Download : 9

Publication Date : 2022-08-15

Article Type : Research Paper

Abstract :Bu çalışmada, iki Leiurus abdullahbayrami akrep venomunun ilk defa MALDI-TOFMS ile analizleri yapılarak, peptit ve protein dağılımları karşılaştırılmıştır. Venomların toplam protein miktarı Nano Ready Touch cihazı ile 280 dalga boyunda ölçülmüş ve 2mg/mL konsantrasyona eşit olacak şekilde hazırlanmıştır. Daha sonra +4 ºC`de 15.000 rpm`de 15 dakika santrifüj edilerek süpernatantlar ayrıldıktan sonra üzerine 250 µL matriks çözeltisi insert ignore into journalissuearticles values(18 mg/mL α-CHCA, 1:1; v/v); ilave edilmiş ve akrep venom matriks örnekleri hazırlanmıştır. MALDI-TOFMS insert ignore into journalissuearticles values(Microflex-LT); ile analizleri meçin çelik plaka üzerine her iki akrep venomuna ait AVMx numunesinden paralel olarak spotlanmış insert ignore into journalissuearticles values(1µL);, oda sıcaklığında kurutulduktan sonra cihaza yüklenmiştir. Sistem 1-50 kDa kütle aralığında lineer pozitif iyon modunda çalıştırılarak iyon kaynağı olarak 337 nm`de 60 Hz nitrojen lazer kullanılmıştır. Kütle spektrumları flexAnalysis yazılımı insert ignore into journalissuearticles values(versiyon 3.4); kullanılarak oluşturulmuştur. Tüm veriler, MALDI Biotyper yazılımına insert ignore into journalissuearticles values(3.1 sürüm); entegre edilmiş yerleşik MATLAB yazılımı tarafından desteklenen filo-proteomik temel bileşen analizi insert ignore into journalissuearticles values(TBA); yöntemi ile venom spektrumlarındaki piklerin izdüşümünü bulunduran sanal jel görüntüleri oluşturulmuştur. Sonuç olarak, peptit ve protein moleküllerinin ve venomlardaki bağıl oranlarının aynı türe ait akreplerde de değmeşkenlik gösterebileceğme deneysel olarak tespit edilmiştir. Öte yandan evrimleşmeye karşı tür karakteristiğini koruyan bu canlıların bazı temel peptit yapılarının insert ignore into journalissuearticles values(3555; 3772, 3996, 6780, 6820 Da; m/z); aynı kaldığı da gözlenmiştir.
Keywords : Akrep, venom, Leiurus Abdullahbayrami, MALDI TOFMS, Kütle spetrometresi

ORIGINAL ARTICLE URL