The Transfection of HepG2 cells with Truncated β-Catenin Coding Expression Vector

Authors : Oğuzhan KARAOSMANOĞLU

Pages : 211-220

Doi:10.35193/bseufbd.658677

View : 14 | Download : 11

Publication Date : 2020-06-28

Article Type : Research Paper

Abstract :β-katenin, Wnt sinyalleşmesinde bir efektör proteinidir. β-katenin mutasyonları; otizm, kolon kanseri, gelişimsel gecikme, zihinsel engel, nörodejenerasyon, baş, deri, ve yüz anomalileri gibi çok sayıda hastalıkların gelişmesinde raporlanmıştır. Bu hastalıklar, özellikle ekson 3 delesyonu aracılı β-katenin kısalmalarıyla ilişkilendirilmiştir. Bu nedenle β-katenin proteininin yabani tip ve ekson 3 delesyonlu formlarının fonksiyonlarını anlamak çok sayıda hastalığın tedavisinde ilerlemeyi sağlayabilecektir. Kontrollü deneyler kurmak için, yabani tip ve ekson 3 delesyonlu β-catenin formlarını kodlayan ve aynı organizmadan kökenlenen ekspresyon vektörlerine ihtiyaç duyulabilmektedir. HepG2 hücrelerinin β-katenin proteinleri bakımından heterozigot olduğu uzun zamandır bilindiği için, bu çalışmada, yabani tip ve ekson 3 delesyonlu ekspresyon vektörlerini HepG2 hücrelerinin toplam RNA'sından oluşturmanın değerli olabileceği düşünülmüştür. Bunun için, HepG2 hücrelerinden RNA izole edilmiştir, cDNA parçaları polimeraz zincir reaksiyonu (PZR) ile çoğaltılmıştır, ifade vektörleri oluşturularak 5’-uçlarından dizilenmiştir. BLAST analizi sonrası hem ekson 3 delesyonlu hem de yabani tip β-katenin kodlayan pcDNA3.1/CTNNB1 ifade vektörlerinin E. coli hücrelerine başarıyla klonlandığı sonucuna varılmıştır. İlginç bir şekilde, HepG2 hücreleri ekson 3 delesyonlu ifade vektörü ile transfekte edildiğinde, β-katenin protein seviyesi etkilenmemiştir. Dahası hücre morfolojisi ve populasyon ikilenme zamanı anlamlı ölçüde değişmemiştir.
Keywords : Kısa uçlu β catenin, Ekson 3, Klonlama, Wnt sinyalleşmesi, BLAST analizi