The Effects of Ovarian Vitrification on Mitochondrial Fusion (MFN-1, MFN2 and OPA-1), Fission (DNM-1), Mitophagy (PARKIN, PINK-1) and Transport (MIRO-1, MILTON) Proteins

Authors : Mustafa ÖZTATLICI, Mahmut Kemal ÖZBİLGİN, Vissun Sevinç İNAN, Merve TEMEL, Hafize Seda VATANSEVER

Pages : 544-550

Doi:10.34087/cbusbed.830175

View : 24 | Download : 13

Publication Date : 2020-12-31

Article Type : Research Paper

Abstract :Giriş ve Amaç: Ovaryan kriyoprezervasyonu, yardımcı üreme teknolojilerinde doğurganlığın korunması için yararlı bir alternatiftir. Vitrifikasyon prosedüründeki birçok ilerlemelere rağmen bu teknik hala deneysel olarak kabul edilmektedir. Bu nedenle bu çalışmada, vitrifikasyon sonrası over dokularında mitokondriyal füzyon (MFN1, MFN2 ve OPA1), fisyon (DRP1), mitofaji (PARKIN, PINK1) ve transport (MIRO-1, MILTON) proteinlerinin ifadelerini qPCR tekniği ile araştırmayı amaçladık. Gereç ve Yöntemler: Vitrifikasyon sonrası mitokondriyal dinamikleri araştırmak için, overler 6-8 haftalık sağlıklı dişi farelerden (No: 12) alındı ve vitrifikasyon ve kontrol gruplarına ayrıldı. Vitrifikasyon, etilen glikol, dimetilsülfoksit ve sukroz kullanılarak gerçekleştirildi. Kontrol ve vitrifikasyon gruplarındaki overlerden total RNA izolasyonu yapıldıktan sonra hedef genlerin ifade oranlarını belirlemek için qPCR tekniği kullanıldı. Hedef genlerin relatif gen ifadeleri 2 −∆∆Ct yöntemine göre değerlendirildi. Bulgular: Histolojik değerlendirme kontrol grubundaki overlerin normal morfoloji gösterdiği, vitrifikasyon grubundaki overlerin ise doku bütünlüğünün bozulduğunu; bazı foliküllerin dejenere olduğunu ve granüloza hücrelerinin antruma döküldüğünü ortaya koydu. qPCR sonuçlarımıza göre vitrifikasyon grubunda kontrol grubuna kıyasla dış membran füzyon proteini MFN1 gen ifadesinin 1,12 kat azaldığı ve iç membran proteini olan OPA-1’in ifadesinin 1,36 kat arttığı saptandı. Mitokondriyal fisyon proteini DRP-1 gen ifadesinin vitrifikasyon grubunda 1,20 kat arttığı bulundu. Mitofaji proteinleri olan PINK-1 ve PARKIN gen ifadelerinin vitrifikasyon grubunda sırasıyla 1,34 ve 3,75 kat azaldığı tespit edildi. Kontrol grubuna göre karşılaştırıldığında transport proteinlerinin; MIRO-1 gen ifadesinin 1,16 kat azaldığı ancak MILTON (TRAK-1) gen ifadesinin 2,28 kat arttığı saptandı. Sonuç: Mitokondriyal dinamikler ile ilişkili gen ifadelerindeki değişimler, ovaryan vitrifikasyonu sırasında mitokondriyal fonksiyonda bir azalmaya yol açabilir ve oosit maturasyonu ve embriyo gelişimi potansiyelini azaltabilir
Keywords : Mitokondri, Mitokondriyal Fisyon, Mitokondriyal Füzyon, Mitofaji, Ovaryan Vitrifikasyon