Hemoglobin D- Los Angeles [ 121(GH4) Glu>Gln] Mutasyonunun Yüzey Plazmon Rezonans (SPR) Spektroskopisi İle Ayırıcı Molekülsel Tanısı

Authors : Erol Ömer ATALAY, Anzel BAHADIR

Pages : 47-52

View : 20 | Download : 13

Publication Date : 2012-03-01

Article Type : Other Papers

Abstract :Amaç: Bu çalışmada, Hb D-Los Angeles anormal hemoglobin (Hb) türünün laboratuar tanısında kullanılanmolekülsel yaklaşımlar irdelenerek, bu hemoglobin türünün gen düzeyinde hızlı ve güvenilir tanısında,biyosensör tabanlı yüzey plazmon rezonans (SPR: Surface Plasmon Resonance) spektroskopisikullanılabilirliğinin gösterilmesi amaçlanmıştır.Gereç ve Yöntem: Bu çalışmada, aralarında akrabalık ilişkisi olmayan, sağlıklı (Hb AA, n:5) ve heterozigotHb D- Los Angeles [ 121(GH4) Glu>Gln] (n:5)'lı bireyler incelenmiştir. Hb D- Los Angeles mutasyonununprotein düzeyinde tanımlanmasında, alkali/asit hemoglobin elektroforezleri, DE-52 mikrokolonkromatografisi yöntemleri kullanılmıştır. Mutasyonun gen düzeyinde saptanmasında ise, polimeraz zincirreaksiyonu (PCR: Polymerase Chain Reaction) tabanına dayalı Eco RI restriksiyon enzimi/ tek nükleotitpolimorfizmi (SNP: Single Nucleotide Polymorphism) ve flüoresan işaretli DNA dizi analiz yöntemlerikullanılmıştır. SPR spektroskopisi kullanılarak, Hb AA ve Hb AD- Los Angeles olgulara ait biyotinliprimerler ile işaretlenmiş PCR ürünleri ile mutasyon odağına özgü Eco RI restriksiyon enzim etkileşimigerçek zamanlı olarak incelenmiştir.Bulgular: SPR spektroskopisi ile Hb AD-Los Angeles ve Hb AA olguları arasındaki farklılıklar gerçekzamanlı olarak belirlenmiştir. Elde edilen verilere göre, SPR spektroskopisi yöntemi, HbAA ve Hb ADLos Angeles mutasyonu arasındaki değişiklikleri algılayabilmektedir. Bağlanma eğrilerinden, Hb AA PCRürünü ile Eco RI restriksiyon enzimi etkileşimi sonucu 400 arc saniyelik, heterozigot Hb AD -Los Angelesolgusunda ise, EcoRI enzimi ve hedef PCR ürünleri arasında 300 arc saniyelik rezonans kayıtları alınmıştır.Aradaki 100 arc saniyelik rezonans fark, Hb D- Los Angeles mutasyonundan kaynaklanmaktadır.Sonuç: Molekülsel tanı yöntemlerinde anormal hemoglobin bozukluklarının doğru biçimde tanımlanmasıönemlidir. Molekülsel tanı yöntemlerinde anormal hemoglobin bozukluklarının doğru biçimde tanımlanmasıönemlidir. Bu yöntemlerden protein ve gen düzeyindeki tanı yöntemlerinde, birçok hemoglobin türü benzerdavranış sergilediklerinden kesin tanı yöntemi DNA dizi analizidir. DNA dizi analizi ise pahalı bir yöntemolması, analizin uzun zaman alması ve deneyimli kullanıcı gereksinimi nedeni ile her laboratuarda rutinbiçimde kullanılamamaktadır.Bu doğrultuda, SPR spektroskopisi yönteminin geliştirilerek, Hb D- LosAngeles ya da benzeri anormal hemoglobin bozukluklarının kısa sürede ve gerçek zamanlı tanısında, rutinuygulamalarda kullanılabileceği sonucuna varılmıştır
Keywords : Hb D Los Angeles, Hemoglobin, Yüzey Plazmon Rezonans SPR Spektroskopi