Agrobacterium tumafaciens aracılığıyla nohut bitkisi (Cicer arietinum L.)’ne gen aktarımı

Authors : Rıdvan TEMİZGÜL, Mikail AKBULUT

Pages : 1-18

View : 15 | Download : 10

Publication Date : 2011-02-01

Article Type : Other Papers

Abstract :Bu çalışmada çeşitli eksplantlar (kotiledon nodları ve embriyo eksenleri), çeşitli büyüme düzenleyicileri ve bu düzenleyicilerin farklı konsantrasyonları gibi parametrelerin rejenerasyon ve transformasyona etkileri araştırılmıştır. Kotiledon nodlarının Agro-vakum infiltrasyonu, çimlendirilmiş nohut tohumlarının Agroinokülasyonu, embriyonun Agroenjeksiyonu ve yüzey sterilizasyonu yapılmış kuru nohut tohumlarının Agrobacterium solusyonu ile imbibisyonu (şişirme, emdirme) olmak üzere dört farklı transformasyon stratejisinin etkinliği denenmiştir. Transformasyon etkinliğine Agrobacterium suşları, kokültüvasyon süresi, eksplantın gelişme evresi, yaralama, infiltrasyon ve kültüvarlar gibi çeşitli parametrelerin etkisi araştırılmıştır. Transformasyon etkinliği geçici GUS aktivitesine bakarak veya selektif ortamda yaşayan eksplantlara dayanarak belirlenmiştir. Transgenlerin varlığı, ayda bir alt kültüre alınan selektif ortamda 3-4 ay seleksiyona tabi tutulmuş bitkilerde PCR analizleri ile belirlenmiştir. Test edilen Agrobacterium tumefaciens suşları arasında (KYRT1, C58C1 ve EHA 101) en iyi yanıt EHA 101 suşundan elde edilmiştir. Selektif ortamda elde edilen sonuca göre transformasyona ise en iyi cevabı Er çeşidi vermiştir.
Keywords : nohut, Agrobacterium, transformasyon, enjeksiyon, infiltrasyon