A REVIEW ON INTEIN MEDIATED RECOMBINANT PROTEIN PURIFICATION PROCESSES WITHOUT USE OF PROTEASE

Bu çalışmada, yapay proteinlerin proteaz kullanılmadan saflaştırılması süreçlerinde yararlanılan inteinlerin ayrılma aktivitelerinin artırılması için inteinler ve hedef proteinler üzerinde yapılan araştırmalar incelenmiştir. İntein kullanımı ile protein ayrışması üzerinde yapılan araştırmalar, intein ve protein saflaştırma süreçlerinin daha verimli hale getirilmesini amaçlamaktadır. In vivo ve in vitro olarak gerçekleşen süreçlerde, intein ve hedef protein içeren poliklonal PCR ürününün çoğaltılması ve ekspres plazmidlerin klonlanan suşlara taşınması işlemleri yapılmaktadır. İnteinin proteinden ayrılma aktivitesi ve ayrılma oranı sabiti kinetikleri, değişik pH, sıcaklık ve süzme sürelerinde belirlenmekte ve hedef proteinlere ilişkili olarak karşılaştırılmaları yapılmaktadır. Araştırmalarda değişik mikrobiyal doğal ve yapay inteinlerin protein ayrıştırma aktiviteleri incelenmiş ve yapay Nostoc punctiforme DnaE C-inteinlerinin ayrışma aktivitelerinin en yüksek olduğu belirlenmiştir. Çalışmalar amino asit eklenmesine daha yatkın olması nedeniyle C-inteinler üzerinde yoğunlaşmaktadır.