Determination of Itraconazole and its Metabolite From Human Plasma by High Performance Liquid Chromatography- Tandem Mass LC-MS/MS Spectrometry

Authors : Zeynep İrem DİLER, Durişehvar Özer ÜNAL, Dilek Demir EROL

Pages : 125-138

View : 22 | Download : 13

Publication Date : 2010-06-01

Article Type : Research Paper

Abstract :İtrakonazol ITR , triazol türevi bir antifungal ilaçtır. Öncelikli olarak mantar hücre membranlarının gerekli bileşeni olan ergosterol sentezini inhibe etmede rol oynar. Çeşitli sistemik mikozların tedavisinde önemli yer tutar. Oral absorbsiyonun arkasından, yan zincir hidroksillenme CYP3A4 ile ile yaygın bir şekilde metabolize olarak hidroksi-itrakonazole HITR dönüşür. ITR ve metabolitinin insan plasmasından HPLC-MS sistemiyle tayininde basit ve hassas bir biyoanalitik metod geliştirildi ve valide edildi. İtrakonazol ve metaboliti, plazmadan sıvı-sıvı ekstraksiyonla ekstrakte edildi. Ekstraksiyon solventi olarak hekzan: isoamilalkol 97:3 karışımı kullanıldı. X-Terra RP18, 3.5 μm, 50 x 4.6 mm HPLC kolonu ve [ asetonitril: 0.066 % ammonia solution 80:20 v/v ] mobil fazı kullanılarak ITR, metaboliti ve ketakonazolün IS kromatografik ayrımı sağlandı. Mobil faz akış hızı 0.4 mL/dak, enjeksiyon hacmi 15μL’dir. Kütle spektrometresine ait parametreler birim rezolüsyonda maksimum hassasiyet sağlayacak şekilde optimize edildi. API-ES pozitif modda çalışıldı. Datalar MRM multiple reaction monitoring olarak toplandı. ITR için m/z 705.30>392.30, HITR için m/z 721.25 >408.30, IS için m/z 531.15 >489.20 kütleleri üzerinden miktar tayini yapıldı. ITR için 1-600 ng/mL, HITR için 2-600 ng/mL derişim aralığında doğrusal kalibrasyon eğrisi oluşturuldu. LOQ değerleri ITR için 1 ng/mL, HITR için 2 ng/mL’dir. Çeşitli koşullarda stabilite sonuçları değerlendirildi ve analiz sonuçları uygun bulundu. Geliştirilen bu metod bioeşdeğerlik ve farmakokinetik çalışmalarda kullanılabilir.
Keywords : İtrakonazol, Hidroksi itrakonazol, Ketakonazol, insan plazması, LC MS MS, bioanalitik metod validasyonu