Pichia pastoris SMD1168 Suşu Kullanılarak Rekombinant Ekspanzin Üretimi

Authors : Asliye KARAASLAN, Hasan VARDİN, Mehmet KARAASLAN

Pages : 101-111

View : 20 | Download : 15

Publication Date : 2019-08-05

Article Type : Research Paper

Abstract :Bu çalışmanın amacı son yıllarda rekombinant protein üretiminde başarılı bir şekilde kullanılan metilotropik P. pastoris SMD1168 suşunu kullanarak domates bitkisinden izole edilen ekspanzin enziminin üretilmesidir. Bu amaçla domates ( Solanum lycopersicum) genomundan toplam RNA izole edilmiş ve spesifik primerler vasıtasıyla çoğaltılarak pHO1 sinyal sekans bölgesine sahip pHIL-S1 vektörüne aktarılmıştır. PZR yöntemi ile 918 baz çiftlik LeExp1 geninin vektör içerisindeki varlığı tespit edilmiş ve hedef geni taşıyan pHIL-S1 vektörü çoğaltılarak Pichia pastoris SMD1168 suşuna elektroporasyon yolu ile transfer edilmiştir. Transgenik P. pastoris SMD1168 suşundan ekspresyon yolu ile ekspanzin proteini üretilmiş ve ekspresyon sonunda toplam protein konsantrasyonu ile kuru hücre ağırlığı ölçümleri yapılmıştır. SDS-PAGE analizi ile elde edilen proteinin ekspanzin olduğu doğrulanmıştır. Bu çalışmanın sonucunda Pichia pastoris SMD1168   suşu ve pHIL-S1 vektörü kullanılarak rekombinant ekspanzin proteini üretimi gerçekleştirilmiştir. 
Keywords : Pichia pastoris SMD1168, rekombinat ekspanzin, pHIL S1, LeExp1