DNA İzolasyonunda Fenol - Kloroform Yerine Potasyum Asetat Kullanımının DNA Miktarı ve Kalitesi Üzerine Etkisi

Authors : Faruk BOZKAYA

Pages : 92-96

View : 11 | Download : 14

Publication Date : 2012-06-01

Article Type : Other Papers

Abstract :Bu çalışmanın amacı polimeraz zincir reaksiyonu (PZR) işlemlerinde kullanılmak üzere kandan genomik DNA izolasyonu amacıyla fenol-kloroform yöntemi yerine potasyum asetat çözeltisi kullanımının elde edilen DNA miktarı ve kalitesi üzerine etkisini araştırmaktır. Bu amaçla Kilis keçilerinden toplanmış olan 13 adet kan örneği kullanılmıştır. Her bir örnekte proteinaz K uygulamasını ardından fenol-kloroform ile DNA izolasyonu veya potasyum asetat ile çöktürme işlemi uygulanmıştır. Elde edilen DNA çözeltilerinin konsantrasyonları ve saflığı sırasıyla 260 nm ve 260nm/280nm de spektrofortometre ile ölçülmüştür. Fenolkloroform ve potasyum asetat grubunda ortalama DNA konsantrasyonu sırasıyla 0,4185±0,2368 ve 0,2753±0,0846 bulunmuştur. Absorbans oranları ise fenol-kloroform ve potasyum asetat grubunda sırasıyla ortalama 1,6380±0,1817 ve 1,7435±0,0659 olarak tespit edilmiştir. Gruplar arasındaki fark istatistiksel açıdan önemli bulunmuştur. Sonuç olarak DNA izolasyonunda proteinleri ortamdan uzaklaştırmak amacıyla potasyum asetat kullanıldığında fenolkloroform grubuna göre daha düşük düzeyde DNA elde edilmiş olsa da yeterli miktar ve kalitede DNA elde edilebildiğinden araştırıcının sağlığı ve çevreye zararlı olan fenol yerine potasyum asetatın DNA izolasyonunda kullanılabileceği kanaatine varılmıştır
Keywords : DNA izolsayonu, fenol kloroform, potasyum asetat, DNA konsantrasyonu