Glutatyon S-transferaz: Koyun Dalak Dokusundan Saflaştırılması ve Karakterizasyonu

Authors : Fatih YÜKSEL, Yusuf TEMEL
Pages : 2352-2363
Doi:10.21597/jist.1150868
View : 40 | Download : 14
Publication Date : 2022-12-01
Article Type : Research Paper
Abstract :Bu çalışmada, hücre içi majör antioksidan sistem olan glutatyon antioksidan sisteminin önemli enzimlerinden glutatyon S-transferaz insert ignore into journalissuearticles values(GST; EC 2.5.1.18); sitozolik enzimi koyun dalak dokusundan homojenat hazırlanması, salting out insert ignore into journalissuearticles values(amonyum sülfat tuzu ile çöktürme yöntemi); ve afinite kromatografisi insert ignore into journalissuearticles values(glutatyon-agaroz); olmak üzere üç adımda 3.67 EÜ mg-1 protein değeri insert ignore into journalissuearticles values(spesifik aktivite); ve %3.73 verim ile 122.3 kat saflaştırıldı. Koyun dalak dokusundan saflaştırılan GST enziminin saflık derecesini belirlemek ve doğal alt birim molekül kütlelerinin tespitinde sodyum dodesil sülfat poliakrilamid jel elektroforez insert ignore into journalissuearticles values(SDS-PAGE); metodu kullanıldı. Koyun dalak dokusu GST enziminin alt birimlerine ait molekül kütlesi yaklaşık olarak 26.36 kDa hesaplandı. Koyun dalak dokusundan saflaştırılan GST enziminin karakterizasyonu için gerçekleştirilen çalışmalarda; optimum pH, K-fosfat tamponu pH=8.0, optimum aktivite gösterdiği iyonik şiddet, K-fosfat tampon çözeltisi 1.0 M, stabil pH, K-fosfat tampon çözeltisi pH = 7.0 ve optimum sıcaklığı 60 oC olarak bulundu. Koyun dalak dokusundan saflaştırılan GST enzimine ait KM ve Vmax değerlerini belirlemek için yapılan kinetik çalışmalarda Lineweaver-Burk grafiklerinden yararlanıldı. Enzimin substratları olan indirgenmiş glutatyon insert ignore into journalissuearticles values(GSH); ve 1-kloro-2,4-dinitrobenzen insert ignore into journalissuearticles values(CDNB); için yürütülen kinetik çalışmalarda; GSH için KM değeri 0.629 mM, Vmax değeri 0.056 EÜ mL-1; CDNB için KM değeri 0.321 mM, Vmax değeri 0.129 EÜ mL-1 olarak belirlendi.
Keywords : saflaştırma, karakterizasyon, koyun, dalak, GST

ORIGINAL ARTICLE URL