Chelon auratus (Risso, 1810)’un Karaciğerinden Glukoz-6-Fosfat Dehidrojenaz’ın Saflaştırılması ve Kinetik Karakterizasyonu

Authors : Salih GÖRGÜN, Emre KOÇ

Pages : 138-144

Doi:10.7212/karaelmasfen.858431

View : 45 | Download : 12

Publication Date : 2021-12-15

Article Type : Research Paper

Abstract :Bu çalışmada, önemli bir kefal balığı türü olan Chelon auratus (Risso, 1810)’un karaciğerinden glukoz-6-fosfat dehidrojenaz (EC 1.1.1.49), 2′5′ ADP-Sepharose 4B afinite kromatografisi ile 252 kat saflık, 27.04 EU/mg.protein spesifik aktivite ve % 27.42 verim ile saflaştırılmıştır. Elde edilen enzim preparatı için optimum sıcaklık, pH ve iyonik güç sırasıyla 40 ºC, pH 8, ve 0.1 M olarak bulunmuştur. Enzimin kinetik davranışı gerek glukoz-6-fosfat (G6P) gerekse NADP+ için değerlendirilmiştir. Elde edilen verilere göre, Km ve Vmax değerleri NADP+ için sırasıyla 0.14 mM ve 3.40 EU/mL olarak belirlenirken, G6P için sırasıyla 0.23 mM ve 2.62 EU/mL olduğu bulunmuştur. Bu veriler, substrat olarak G6P ile karşılaştırıldığında, enzimin NADP+ için daha yüksek bir afinite sergilediğini önermektedir. Saflaştırılan enzim preparatında SDS-PAGE analizi sonucunda, molekül kütlelerinin yaklaşık olarak 108 kDa ve 60 kDa olan iki protein bandının olduğu görülmüştür. Elde edilen sonuçlar, kefal türlerinden glukoz-6-fosfat dehidrojenazın saflaştırılmasında ek kromatografik adımların gerekli olduğunu önermektedir.
Keywords : Chelon auratus Risso, 1810, glukoz 6 fosfat dehidrojenaz, saflaştırma, kinetik karakterizasyon

ORIGINAL ARTICLE URL