Recombinant Production of E. coli NAD+-dependent DNA ligase as a Target for Antibacterial Drug Discovery

Authors : Özlem KAPLAN, Rizvan İMAMOĞLU, İsa GÖKÇE

Pages : 19-24

Doi:10.18016/ksutarimdoga.vi.884279

View : 20 | Download : 15

Publication Date : 2022-02-28

Article Type : Research Paper

Abstract :Bakteriyel enfeksiyonlarda ilaç direnci frekansındaki artış, yeni mekanizmaları hedefleyen yeni antibakteriyel ajanların araştırılmasına yol açmıştır. NAD+-bağımlı DNA ligazın fonksiyonlarının bir çoğu, onu antibakteriyel ilaç keşfi için dikkate değer bir hedef haline getirmiştir. Escherichia coli (E. coli) NAD+ bağımlı DNA ligazı, ATP bağımlı insan DNA ligazı ile karşılaştrıldığında, benzersiz substrat özgüllüğü nedeniyle potansiyel bir hedef olarak görülmektedir. Bu çalışmada antibakteriyel ilaç keşiflerinde sıklıkla kullanılan E. coli NAD+ bağımlı DNA ligaz enziminin, yüksek miktarda ve saflıkta üretilmesi amaçlamıştır. E. coli DNA ligaz gen dizisi, pTOLT vektör sistemine klonlanmıştır. E. coli DNA ligaz enzimi, E. coli BL21 (DE3) pLysE hücrelerinde üretildikten sonra saflaştırılmıştır. Bu çalışmada üretilen DNA ligaz enziminin DNA fragmanlarının ligasyonunu sağlayabildiği, aktivite testi ile açıkça gösterilmiştir. Sonuç olarak, bu enzim üzerinde aday inhibitörlerin etkisinin basitçe incelenebileceği ortaya koyulmuştur.
Keywords : NAD bağımlı DNA ligaz, TolAIII peptid, Antibakteriyel İlaç Keşfi