7 GÜNLÜK İN-VİTRO SIĞIR EMBRİYOLARININ VİTRİFİKASYONLA DONDURULMASI

Authors : Sedat Hamdi KIZIL, Numan AKYOL, Tahir KARAŞAHİN, Muharrem SATILMIŞ

Pages : 1-5

View : 16 | Download : 8

Publication Date : 2007-12-01

Article Type : Research Paper

Abstract :Bu çalışmanın amacı, in vitro olarak üretilen sığır embriyolarının, vitrifikasyon metodu ile dondurulma başarısının incelenmesidir. Mezbahada kesilen ineklerin ovaryumlarından elde edilen oositlerden üretilmiş 100 adet iyi kalite in-vitro sığır embriyosu, kültürlerinin yedinci gününde vitrifikasyon metodu ile dondurulmuştur. Vitrifikasyon solüsyonları olarak, VS1 (0.1 M Sakkaroz + 0.1 M Ksiloz + %1 Polietilen Glikol + %10 Gliserol), VS2 (0.2 M Sakkaroz + 0.2 M Ksiloz + %2 Polietilen Glikol + %10 Gliserol + %10 Etilen Glikol) ve VS3 (0.3 M Sakkaroz + 0.3 M Ksiloz + %3 Polietilen Glikol + %20 Gliserol + %20 Etilen Glikol) kullanılmıştır. Vitrifikasyon solüsyonları ile muamele edilen embriyolar payetler içine yerleştirildikten sonra sıvı azot içerisinde dondurulmuştur. Çözündürmede, sıvı azot içerisinden çıkarılan payetler 5-6 saniye havada tutulmuş, 200C’de suda tamamen çözündürülmüştür. Embriyolar kriyoprotektanların uzaklaştırılması (devitrifikasyon) işlemi için sırasıyla 0.5 M ve 0.25 M Sakkaroz solüsyonları içerisine alınmıştır. Sonra embriyolar morfolojik değerlendirme için %20 buzağı serumlu Dulbecco’nun Fosfat Tampon Solüsyonu (D-PBS) içerisine alınmıştır. Kültür medyumu olarak TCM-199 + 0,1mM β-Merkaptoetanol + %20 Fötal Buzağı Serumu (FCS) kullanılmıştır. İn vitro canlılık kontrolü amacıyla embriyolar, %5 CO2, %99 bağıl nem ve 38,50C‘deki inkubatörde 24-48 saat inkubasyona tabi tutulmuştur. Çözündürme sonrası PBS’e alınan 100 adet embriyonun, 85’inin intakt olduğu görülmüştür. Blastosistlerin re-ekspansiyon ve zonadan çıkma oranı %35 bulunmuştur. Buna göre in vitro üretilerek vitrifiye edilen sığır embriyolarında %35 canlılık tespit edilmiştir. İn vitro üretilen embriyolar vitrifikasyon metodu kullanılarak kolaylıkla dondurulmuş ve tatminkar düzeyde canlılık sağlanmıştır.
Keywords : Embriyo, sığır, vitrifikasyon, kriyoprotektan