Maternal serumdan doğrudan-PCR ile fetüsün cinsiyetinin belirlenmesi

Authors : Uğur Akpulat, Çiğdem Eresen Yazıcıoğlu

Pages : 311-322

View : 48 | Download : 37

Publication Date : 2024-08-16

Article Type : Research Paper

Abstract :Amaç: Fetüsün sağlık durumunu ciddi ölçüde etkileyebilecek anöploidiler ve cinsiyete bağlı geçiş gösteren genetik hastalıklar için, günümüzde maternal dolaşımdaki fetüse ait serbest DNA’nın incelenmesine dayanan analizler, girişimsel yöntemlere bağlı komplikasyonları en aza indirmek amacıyla yaygın olarak tercih edilmektedir. Bu analizlerin güvenirliğini etkileyen başlıca etken analiz edilebilir miktarda fetüse ait DNA’nın elde edilebilirliğidir. Maternal dolaşımdaki serbest DNA’nın izolasyonu sırasında kaynaktaki miktara göre her zaman bir kayıp yaşanmaktadır. Bu gibi durumlarda alternatif bir yaklaşım da kaynağın herhangi bir izolasyon işlemi yapılmadan kalıp olarak kullanıldığı doğrudan-PCR yöntemi ile analiz edilmesidir. Çalışmamızda PCR analizi ile fetüsün cinsiyetini belirlemede maternal serumun doğrudan kullanılabilirliği test edilmiştir. Yöntem: Fetüsün cinsiyetini belirlemek amacıyla Y kromozomu üzerindeki DYS14 ve SRY genlerine özgü PCR reaksiyonları tasarlanmıştır. Analiz edilmek üzere 40 gebe kadının serum örneği araştırmaya dahil edilmiştir. Serum örneklerinin Y kromozomu için tasarlanan reaksiyonlarında özgün amplifikasyon görülmesi durumunda fetüsün cinsiyeti erkek, görülmemesi durumunda dişi olarak kabul edilmiştir. Özgün amplifikasyonun görülmediği durumlarda DNA’nın varlığı GAPDH’e özgü PCR ile teyit edilmiştir. Bulgular: PCR analizi ile elde edilen sonuçlar ile klinik sonuçlar karşılaştırıldığında, doğrudan-PCR analizi ile fetal cinsiyeti belirleme duyarlılığının %87.5, özgünlüğünün %81.8 ve pozitif tahmin değerinin (PPV) %91.3 olduğunu ortaya koymuştur. Sonuç: Elde edilen sonuçlar, fetüsün genetik durumunu ortaya koymak amacıyla, gebe kadınların serum örneklerinin doğrudan moleküler analizlerde kullanılabileceğini göstermektedir.
Keywords : Serbest fetal DNA, maternal serum, doğrudan PCR, DYS14, SRY