Mass-spectrometric mapping of VDAC (voltage dependent anion channel) from mouse brain membranes with high sequence coverage

Authors : Natalia AKENTIEVA

Pages : 225-248

Doi:10.26453/otjhs.458683

View : 13 | Download : 11

Publication Date : 2018-12-29

Article Type : Research Paper

Abstract :VDAK`lar insert ignore into journalissuearticles values(voltaj bağımlı anyon kanalları); spesifik olmayan difüzyon gözenekleri veya mitokondriyal membran aracılı substratların taşınması için özel sistemler olarak hizmet veren entegre membran proteinleridir. VDAK`ın fonksiyonel rolü birçok çalışmada araştırılmış ve VDAK`ın farklı işlevleri gösterilmiştir. VDAK`ın post-translasyon modifikasyonları regülasyonu için önemlidir. VDAK`ın post-translasyon modifikasyonları regülasyonu için önemlidir. Araştırmamızın amacı, VDAK`ların post-translasyonel ve diğer zar proteinlerinin modifikasyonları ve primer yapının karakterizasyonu için yaklaşım geliştirmektir. Fare beyin zarları diferansiyel santrifüjleme ile fare beyninden izole edildi. Fare beyin zarlarından gelen mitokondriyal izoform VDAK`ın primer yapısı tripsin ile proteolitik yıkımdan sonra peptit karışımlarının LTQ-FTMS haritalama ve SDS-PAGE `nin kombinasyonu ile  neredeyse tamamı insert ignore into journalissuearticles values(% 95, 283 amino asitin 258`i); tanımlanmıştır. VDAK’ın bulunan her bir peptid dizisi doğru kütle, izotopik dağılım ve MS / MS tandem analizine göre analiz edilmiş ve doğrulanmıştır. VDAK’ın peptitlerinin post-translasyon modifikasyonları gösterilmiştir. VDAK`ın yüksek dizi içeriği 11 transmembran alanı dahil olmak üzere elde edilmiştir.  30-34 kDa`da diğer bazı proteinler için geniş çaplı sekans içeriği de tespit edilmiştir. Sırasıyla; östrojen reseptorü baskılayıcısı aktivitesinin içeriğinin %76’sı, malat dehidrogenazın %55’i, sintaksin 1A ve sintaksin 1B2’nin %60 ve %65’i belirlenmiştir. Bu sonuçlar, kütle spektrometrik haritalamanın ana yapı membran proteinlerinin karakterizasyonu ve bunların post-translasyonel modifikasyonlarının tanımlanması için güvenilir ve duyarlı bir yaklaşım olduğunu göstermiştir.
Keywords : VDAC, birincil yapı