Aspergillus sojae Tarafından Üretilen Poligalakturonazın Kısmi Saflaştırılması için Kromatografik Bir Yaklaşım

Authors : İlknur SEN, Marco A MATAGOMEZ, Marco RİTOPALOMARES, Canan TARİ, Melike DİNÇ

Pages : 8-16

Doi:10.24323/akademik-gida.305767

View : 15 | Download : 16

Publication Date : 2017-04-15

Article Type : Research Paper

Abstract :Bu çalışmanın amacı, A. sojae mutantından poligalakturonaz üretilmesi ve ham ekstraktın kromatografik yöntemlerle kısmi saflaştırılmasıdır. Peptitlerin konfirmasyonu için ilk basamak olarak, jel içinde sindirilmiş sodyum-dodesil-sülfat-poliakrilamid-jel-elektroforezi insert ignore into journalissuearticles values(SDS-PAGE); jellerinde matriks-yardımlı lazer desorpsiyon/iyonlaştırmalı-uçuş zamanlı-kütle spektrometresi insert ignore into journalissuearticles values(Maldi-TOF MS); analizi yapılmıştır. Poligalakturonaz üretimi için, katı-faz ve derin fermentasyonlarda üç farklı karbon kaynağı kullanılmıştır. Ham ekstrakt ilk olarak iyon değişim kromatografisi insert ignore into journalissuearticles values(IEXC); ile saflaştırılmıştır ve ardından bunu boyut eleme kromatografisi izlemiştir. Derin [acı portakal kabuğu, şeker pancarı melası ve insert ignore into journalissuearticles values(NH 4 ); 2 SO 4 ] ve katı-faz insert ignore into journalissuearticles values(buğday kepeği, şeker pancarı ve HCl); fermentasyonlarından elde edilen ham ekstraktlar yüksek seviyede poligalakturonaz enzim aktivitesi insert ignore into journalissuearticles values(sırasıyla 95.22 and 50.27 U/mL); göstermiştir. IEXC toplanmış fraksiyonunun insert ignore into journalissuearticles values(180, 200 ve 220 mM tuz fraksiyonları); boyut elemesi, en yüksek verimi insert ignore into journalissuearticles values(%36); ve saflaştırma katını insert ignore into journalissuearticles values(2.00); göstermiştir. SDS-PAGE’den elde edilen olası poligalakturonaz bantları jel içinde sindirilmiş ve peptit konfirmasyonu için Maldi-TOF-MS ile analiz edilmiştir. 
Keywords : Aspergillus sojae, Poligalakturonaz, Maldi TOF MS, Boyut eleme kromatografisi, İyon değişim kromatografisi