Bakteriyel lipopolisakkaridin preadiposit diferensiyasyonu üzerine etkisi: NO’nun ve Rho-kinaz enziminin olası katkısı

Authors : Ahmet Sencer YURTSEVER, Kansu BÜYÜKAFŞAR

Pages : 257-270

Doi:10.26559/mersinsbd.538541

View : 45 | Download : 10

Publication Date : 2019-08-30

Article Type : Research Paper

Abstract :Amaç: Preadipositlerin diferensiyasyonu adipogenezis için önemli basamaklardan biridir. Adipogenezis, düşük düzeyde inflamasyonun eşlik ettiği ve pek çok komplikasyonu olan metabolik bir hastalıktır. Bu çalışmamızda, inflamatuar yanıt oluşturan bakteriyel endotoksinlerden LPS’nin 3T3-L1 hücrelerinde diferensiyasyon üzerine etkisini ve bu etkiye NO ve Rho/ROCK yolağının katkısını araştırmayı amaçladık. Yöntem: Preadipositlerin adipositlere diferensiyasyonu için fibroblast kökenli 3T3-L1 hücreleri kullanıldı. 24 kuyucuklu pleytlere 20.000 hücre olacak şekilde ekim yapıldı ve standart preadiposit diferensiyasyon protokolü uygulandı. Diferensiyasyonun indüklenmesi için protokolün 0-2. günü 0.25 µM deksametazon, 0.5mM izobutilmetilksantin ve 1μM insülin içeren %10FBS/DMEM uygulandı. Protokolün 2-4. günleri 1μM insülin içeren %10 FBS/DMEM uygulandı. 4-8. gün ise kuyucuklara sadece %10 FBS/DMEM konuldu. İnkübasyon 8. güne kadar sürdürüldü. Diferensiyasyon protokolünün belirli zaman noktalarında insert ignore into journalissuearticles values(0-2, 2-4, 4-8, 0-8. günler); bakteriyel LPS insert ignore into journalissuearticles values(10-100 ng/ml);, L-NAME insert ignore into journalissuearticles values(2-5x10 -4 M); varlığında ya da yokluğunda uygulandı. Diferensiyasyon, 8’inci günde Oil Red-O boyaması ile değerlendirildi. LPS’nin iNOS ve Rho/Rho-kinaz ekspresyonları üzerine etkileri de Western-blot analizi ile değerlendirildi. Ayrıca, kültür ortamında nitrit düzeyleri, LPS ve L-NAME varlığında Griess yöntemi ile ölçüldü. Bulgular: LPS uygulaması, 0-2. gün dışındaki zaman aralıklarında diferensiyasyonu anlamlı bir şekilde baskıladı. L-NAME ön uygulaması, bu süpresyonu ortadan kaldırmadı ancak tek başına L-NAME, 0-2. gün dışında tüm zaman aralıklarında diferensiyasyonu süprese etti. LPS hem iNOS hem de ROCK-2 ekspresyonunu arttırdı. LPS’nin ROCK ekspresyonunu arttırıcı etkisi L-NAME tarafından değiştirilmedi. L-NAME tek başına uygulandığında LPS’ye benzer şekilde ROCK-2 ekspresyonunu arttırdı. Sonuç: Bir bakteriyel endotoksin olan LPS, 3T3-L1 hücrelerinde diferensiyasyonu baskılamaktadır. Bu etkiye NO değil ancak onun dışındaki bir inflamatuar mediyatörinsert ignore into journalissuearticles values(ler); aracılık edebilir. Ayrıca LPS, Rho/ROCK bağımlı bir mekanizma ile preadiposit diferensiyasyonunu süprese edebilir. 
Keywords : Adiposit, diferensiyasyon, LPS, NO, Rho kinaz

ORIGINAL ARTICLE URL