The Effect of Endoplasmic Reticulum Stress Activator-Tunicamycin on HEK293 Cells

Authors : Muhammed Abdulvahid KALKAN, Burçak VURAL, Evrim KÖMÜRCÜ BAYRAK

Pages : 71-78

View : 33 | Download : 10

Publication Date : 2018-12-02

Article Type : Research Paper

Abstract :DOI : 10.26650/experimed.2018. 462982 Amaç : Endoplazmik Retikulum insert ignore into journalissuearticles values(ER);, protein katlanması ve işlenmesi yanı sıra Ca+2 ve glikojen deposu ve hücre membran lipidlerinin biyogenezi gibi fonksiyonlara sahiptir. Hipoksi, viral enfeksiyonlar, yanlış protein katlanmaları, protein birikimleri ve bazı kimyasallar hücrede, ER stresine sebep olarak katlanmamış protein yanıtı insert ignore into journalissuearticles values(UPR); sistemlerini devreye sokmaktadır. Bu kimyasallardan biri olan Tunikamisin, asparajin-bağlı glikoproteinlerin sentezinin ilk adımında görev alan GPT insert ignore into journalissuearticles values(GlcNAc fosfotransferaz); enzimini inhibe ederek hücrede ER stresine sebep olan bir antibiyotiktir. Bu çalışmada, ER stresini in vitro araştırmak için en uygun deney şartlarının belirlenmesi amaçlanmıştır. Gereç ve Yöntem : HEK293 hücre hattı uygun kültür koşullarında çoğaltılarak 5 farklı dozda insert ignore into journalissuearticles values(0,5-1-2-5 ve 10 µg/mL);, 12 saatlik Tunikamisin uygulanmıştır. 1-2-4-8 ve 12 saatlik sürelerle ışık mikroskobunda morfolojik değerlendirilmeleri yapılmıştır. Normal HEK293 hücreleri ile 0,5 ve 1 µg/mL Tunikamisin uygulanan hücrelerden total RNA izolasyonu ve cDNA sentezi yapılmıştır. Tunikamisin uygulamasının ER stres açısından değerlendirilmesi için UPR sisteminden seçilen CHOP, BiP, GADD34, ATF4, EDEM1, ASK1, XBP1 insert ignore into journalissuearticles values(spliced, unspliced ve total);, TRAF2, HERP, PDIA4 genlerinin qRT-PCR yöntemi ile gen ekspresyonları normal hücrelere göre kıyaslanmıştır. Bulgular : Tunikamisin uygulamasından 1-2-4-8 ve 12 saatlik ışık mikroskobunda HEK293 hücrelerinin morfolojilerinin sadece 0,5 ve 1 µg/mL konsantrasyonlarda korunduğu gözlenmiştir. Diğer dozlarda ise daha ilk saatten hücrelerin morfolojik yapılarının bozulduğu gözlenmiştir. qRT-PCR yöntemi ile UPR-ilişkili genlerden BiP, ASK1, PDIA4, s-xBP1, us-XBP1, t-XBP1, HERP ve CHOP rölatif kantitasyon değerlerinde Tunikamisin uygulanmış HEK293 hücrelerin normal hücrelere göre anlamlı bir artış saptanmıştır. ASK1 ile aynı yolaktan olmasına rağmen TRAF2 geni rölatif kantitasyon değerinde azalma gözlenmiştir. Sonuç : HEK293 hücrelerinde ER stresinin oluşturulabilmesinde 0.5 ve 1 µg/mL ’ lik  Tunikamisin uygulaması uygun bulunmuştur. Daha yüksek dozların HEK293 hücrelerini apoptoza yönlendirdiği düşünülmektedir. 
Keywords : Endoplazmik retikulum stresi, tunikamisin, HEK293 hücreleri, katlanmamış protein yanıtı

ORIGINAL ARTICLE URL