Sık Kullanılan Bazı Hücre Hatları için Kalite Kontrol: Mikoplazma Kontaminasyon Tespiti, Sitokrom B ve Sitokrom Oksidaz Alt Birim I Genlerinin DNA Dizi Analizlerinin Gerçekleştirilmesi

Authors : Habibe KAHYA, Tugce KARADUMAN

Pages : 770-786

Doi:10.38079/igusabder.1114239

View : 27 | Download : 9

Publication Date : 2022-12-31

Article Type : Research Paper

Abstract :Amaç: Laboratuvarlarda sık kullanılan serviks epitelyal karsinom insert ignore into journalissuearticles values(HeLa);, insan periferal kan promiyelösitik lösemi insert ignore into journalissuearticles values(HL-60);, fare C3/bağ dokusu insert ignore into journalissuearticles values(L929);, Madin Darby köpek böbrek insert ignore into journalissuearticles values(MDCK);, fare nöroblastom insert ignore into journalissuearticles values(Neuro-2a); gibi bazı hücre hatlarının mikoplazma kontaminasyon kontrollerinin yapılması, kimlik doğrulamalarının gerçekleştirilmesi ve klonalitelerinin belirlenmesidir. Yöntem: Bu çalışmada üç farklı türe ait beş hücre hattı kullanılmıştır. Çalışılan tüm hatların Bisbenzimid insert ignore into journalissuearticles values(Hoechst 33258); ile deoksiribonükleik asit insert ignore into journalissuearticles values(DNA); floresan işaretlemesi yapılarak mikoplazma kontaminasyonu kontrolleri gerçekleştirilmiştir. Hücre hatlarından DNA izolasyonları yapılmış, elde edilen DNA örneklerinden sitokrom B insert ignore into journalissuearticles values(CYTB); geninin bölgesel amplifikasyonu için L14816 ve H15173 primerleri; sitokrom oksidaz alt birim I insert ignore into journalissuearticles values(COI); geni için ise LCO 1490 and HCO 2198 primerleri kullanılmıştır. İlgili amplifikasyonların DNA dizi analiz sonuçları, biyoinformatik araçlar kullanılarak referans dizilerle karşılaştırmalı olarak değerlendirilmiştir. Bulgular: Çalışmada ilgili hücrelerin, Bisbenzimid insert ignore into journalissuearticles values(Hoechst 33258); ile üretici firmanın protokollerine göre belirlenen konsantrasyon ve sürede yapılan boyama sonucunda mikoplazma kontaminasyonuna rastlanılmamıştır. Ayrıca CYTB gen bölgesi için veritabanında yer alan referans dizi ile yapılan karşılaştırma sonucu HL-60 için %97; \`HeLa, L929, MDCK, Neuro-2a” hücre hatları için ise %98 oranında benzerlik bulunmuştur. COI gen bölgesi için ise bu benzerlik oranları “HeLa, HL-60, L929, MDCK ve Neuro-2a” hücre hatları için sırasıyla %95, %99, %96, %96 ve %98 olarak bulunmuştur. Sonuç: Bu bağlamda, çalışmadan elde edilen Bisbenzimid insert ignore into journalissuearticles values(Hoechst 33258); işaretleme ve DNA dizi analiz sonuçları, pek çok araştırmada kullanılan bu hücre hatlarının kalitesi konusunda kabul edilebilir bir belirteç ve güven sağlamıştır.   
Keywords : Hücre kültürü, CYTB, COI, DNA dizi analizi, mikoplazma, Hoechst 33258

ORIGINAL ARTICLE URL